推荐将基于免疫组化的表达谱而开发的Prestige Antibodies®按照以下所描述的标准IHC染色实验方法进行使用。
将厚度为4 µm的石蜡切片在50 °C烘烤过夜。在免疫染色之前,在二甲苯和分级乙醇和分级乙醇制蒸馏水中进行脱蜡和水化。在水化过程中,在95%乙醇中的0.3% H2O2中对内源性过氧化物酶进行封闭5分钟。
标准抗原修复方法是在pH 6的修复缓冲液中通过使用高压锅炉(Decloaking室,Biocare Medical,Walnut Creek,CA,美国)作为热源而进行的热诱导表位修复(HIER)。
可通过将浸没在修复缓冲液中的TMA玻片在压力锅炉中125°C加热4分钟而进行HIER。在完全煮沸后,玻片会被保留在压力锅炉中并冷却至90 °C。总处理时间约为45分钟。
注意:一抗的特定工作稀释比仅作为指南参考。最佳的稀释比必需由用户进行确定。
所有的孵育过程都是在室温的。
所有试剂用于每张玻片上的体积都是300 µL。
* 对于多克隆抗体可忽略第6和7步。
** 第14 - 16步是在组织染色仪(Leica Autostainer XL)中进行的。
对于特定的抗体,可按照产品数据表中所述,使用替代的修复缓冲液或酶法抗原修复方法。
酶法抗原修复是在免疫染色仪器中进行的,指在室温下将TMA玻片在蛋白酶K中孵育10分钟。
pH 9的修复缓冲液中的HIER可作为标准的HIER,除非使用了pH 9而非pH 6的修复缓冲液。
2017年十月修改
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