用于亲和层析的色谱柱填充和制备实验方案

Cytiva预装色谱柱可以确保结果的可重复性和性能的最优化。然而，如果需要填充色谱柱，则可以依据以下适用于所有规模操作的准则：

• 高粘合力的介质应使用短而宽的色谱柱进行快速纯化，即使是在低线性流速下。
• 即用型的亲和介质是提供有每ml结合能力的详细信息的。除非特殊声明，可估计结合目标分子所需的介质的量，并使用该量的二至五倍来填充色谱柱。可参考产品指南获取更多关于缓冲液、流速等具体信息。
• 对于由预激活基质而制成的亲和介质，请确定介质的结合能力。估计结合目标分子所需的介质的量，并使用该量的二至五倍来填充色谱柱。

亲和介质可以封装在Cytiva的Tricorn™或XK色谱柱中。可以在CD格式的“电影”中看到柱填充的分步演示（参见订购信息）。

1.将所有材料平衡至分离所需的温度。用
2.推荐的缓冲液冲洗色谱柱末端除去空气。确保柱网下方没有空气。关闭柱出口并在柱中留下1-2 cm的缓冲液。
3.轻地重新悬浮介质。

对于未以悬浮液形式提供的介质，请使用约1:2的介质：缓冲液比例以产生悬浮液用于在重新水化期间进行混合。

应避免使用磁力搅拌器，因为它们会损坏基质。

4.根据提供的建议估算所需的浆料（重悬填料）的量。
5.将所需体积的浆料倒入色谱柱中。沿着贴在柱内壁上的玻璃棒倒入以减少气泡的引入。
6.立即用缓冲液填充色谱柱。
7.安装色谱柱顶部件并连接到泵。
8.打开色谱柱出口并将泵设置为所需的流速。

若无法调至推荐的流量，请调至泵可以承载的最大流量。

不要超过介质或色谱柱的最大操作压力值。

9.在柱床高度不变的情况下，保持至少3个柱体积的填料流量。标记色谱柱上的床高。

任何纯化过程中不得超过75%的填充流量。

10.停止泵运转并关闭色谱柱出口。取下顶部部件，并用缓冲液小心地填充色谱柱的其余部分并在顶部形成向上的弯液面。
11.将适配器以一定角度插入色谱柱，确保网下没有空气。
12.将适配器缓慢向下滑入色谱柱（适配器的出口应打开）直达标记。锁定适配器锁位置。
13.将色谱柱连接到泵并开始平衡。必要时可重新定位适配器。

填料须经过彻底清洗以除去储存溶液，通常是20％乙醇。残留的乙醇可能会干扰后续步骤。

许多经过含有抗菌剂的无菌磷酸盐缓冲盐水平衡的介质可以在+4 °C下储存长达1个月，但仍须遵循产品附带的储存专门说明。

色谱柱选择

Tricorn™和XK色谱柱可以完全兼容现代填料承载的高流速，并有多种尺寸可供选择。下面列出了最适合于填充亲和介质的色谱柱。大多数情况下，亲和介质的能力和待纯化的样品量将决定所需的色谱柱尺寸。