二辛可宁酸（BCA）法测定蛋白质

1.目的

提供用BCA法定量测定溶液总蛋白浓度的标准程序。

2.范围

本方案适用于所有需要通过BCA方法进行蛋白质分析的受管制产品。

3.讨论

蛋白质以浓度依赖性方式将碱性Cu（II）还原成Cu（I）。二辛可宁酸是Cu（I）形成络合物的高度特异显色剂，在562nm处吸光度最大。由于这种特质，562nm处的吸光度与蛋白质浓度成正比。牛血清白蛋白作为蛋白质标准品。

4.定义

N/A

5.责任

N/A

6.流程

6.1试剂

6.1.1二辛可宁酸溶液，产品编号B9643.

6.1.2五水合硫酸铜（Ⅱ）4%溶液，产品编号C2284.

6.1.3蛋白质标准溶液，1.0 mg/mL牛血清白蛋白（BSA），产品编号P0914.

6.1.4测试样品

说明：其他BSA也可作为标准品。但是，如果需要稀释到1 mg/mL，用E^1%₂₈₀=6.67在280 nm处通过吸光度法确认蛋白质浓度。样品应在0.2-10mg/mL蛋白之间，以保持在本测定的线性范围内。用水稀释可能需要控制在该范围内。

6.2材料

6.2.1分光光度计，Uvikon 943，或等同物。

6.2.2吸管/吸头

6.2.3试管

6.2.4试管架

6.2.5一次性比色皿，产品编号C5416，或等同物。

6.2.6孵化器，Imperial III蛋白染色剂，或等同物。

6.3安全预防措施

请参阅材料安全数据表（MSDS），以了解化学品危害和适当的处理预防措施。

6.4方法

6.4.1将1 mL硫酸铜（KK）五羟酸盐4%溶液（C2284）加入到49 mL二辛可宁酸溶液（B9643）中，配制成蛋白质测定试剂。

6.4.2定量地将标示量的水和蛋白质标准品加入到标示试管中。