form
solution
usage
sufficient for 20 reactions (transcription)
packaging
pkg of 40 μL
manufacturer/tradename
Roche
impurities
Ribonuclease, none detected
color
colorless
solubility
water: miscible
storage temp.
−20°C
General description
用于生物素-16-UTP标记RNA的便捷核苷酸混合物。
Application
生物素RNA标记混合物已用于通过生物素-16-UTP与SP6、T7和T3 RNA聚合酶体外转录的RNA标记。
生物素标记RNA还应用于一系列杂交技术：
生物素标记RNA还应用于一系列杂交技术：
- DNA印迹
- RNA印迹
- 斑点印迹
- 菌落及菌斑清除
- RNA酶保护试验
- 原位杂交
- 微阵列杂交
- RNA pull down试验
Biochem/physiol Actions
热灭活：添加2 μl 0.2 M EDTA (pH 8.0)以终止反应。
生物素标记的、确定长度的单链RNA探针通过体外转录产生。生物素-16-UTP通过SP6、T7和T3 RNA聚合酶以大约每20到25个核苷酸的间隔插入转录产物中，转录条件如下所述。生物素RNA标记混合物专为Roche SP6、T7和T3 RNA聚合酶设计，随附优化的转录缓冲液。
Features and Benefits
组份
10x 浓缩液包含: ATP、CTP、GTP各10mM，6.5mM UTP，3.5mM生物素-16-UTP，pH 7.5
10x 浓缩液包含: ATP、CTP、GTP各10mM，6.5mM UTP，3.5mM生物素-16-UTP，pH 7.5
Preparation Note
试验时间：135分钟
样品材料
样品材料
- 线性化质粒DNA：待转录的DNA将会被克隆至含有SP6，T7或T3 RNA聚合酶启动子并相邻于多接头的合适转录载体的多接头位点。对于′流失′转录本的合成，质粒是通过限制性酶进行线性化的。应使用限制性酶生成的5′-突出；应避免3′突出。线性化模板DNA应采用酚氯仿萃取和乙醇沉淀法纯化，以避免RNase污染。为′完成′转录，使用了环状质粒DNA
- PCR产物：含有RNA聚合酶启动子序列的PCR片段，也可以作为转录模板。推荐在转录前通过凝胶电泳纯化正确的PCR片段。
- 标记效率：μ通过1μg线性模板DNA和RNA聚合酶进行标准标记反应，产生大约10μg全长生物素标记RNA。在斑点试验中，联用抗生物素-AP与化学发光底物CSPD可检测低至0.3pg的生物素标记RNA。
Analysis Note
结合DIG RNA标记试剂盒进行了功能检测。
Other Notes
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
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WGK 1
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