一般描述
应用
生化/生理作用
特点和优势
- 使用CRISPR核酸酶敲除蛋白编码基因，以评估以下功能：
- 在没有机器人或专门设备的情况下，在工作台上高效筛选整个全人类基因（16,000+基因）
- 提高灵活性，从2个子池（Gecko v2）增加到8个子池且每池23，000个克隆（共计184，000个克隆）
- 从之前每个基因6个gRNA扩展到10个gRNA（Gecko v2）
- 大量既定浓缩和损耗控制使研究人员可以自信地评估其克隆池筛选实验的成功程度
- 2向量系统（克隆池仅适用于gRNA，Cas9单独有售）
- 便于优化：使用与Gecko v2相同的向量系统可对两个系统进行优化
- 最小化脱靶效应：严苛的gRNA设计和平铺规则
制备说明
在进行文库规模的筛选之前，必须进行两个预实验：（1）测定靶细胞类型对嘌呤霉素的敏感性（Kill曲线）；以及（2）通过集落形成分析（以CFU/ml为单位）测定细胞类型中慢病毒的功能性滴度。 MOI（感染复数）的计算应基于CFU值。 不同的细胞类型的转导效率有所不同，不同的慢病毒结构表现也不尽相同，因此在进行克隆池实验前，利用控制慢病毒CRISPR克隆（可从Sigma获得）优化实验条件至关重要。
其他说明
储存分类代码
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 3
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实验方案
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