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使用用于分子诊断的超纯PCR解决方案获得可靠结果

分子诊断简介

分子诊断技术日新月异,为新兴疾病的检测与治疗提供了必要的工具。新冠疫情凸显了精准可靠诊断检测方案的必要性,也揭示了医疗工作者面临的独特难题。随着分子诊断持续演进,市场对高品质 PCR 试剂的需求日益迫切。我们的Ultra pure系列采用 M-Clarity MQ-300 级纯化工艺,将 DNA、Nickase、DNase 及 RNase 的残留降至极低水平,从源头减少假阳性或假阴性风险,让研究人员与临床医生对诊断结果更有信心。

超纯RT-PCR试剂可提高准确度

我们推出的超纯 RT-PCR 试剂专为满足最高纯度标准而设计,去除了 DNA、DNase、RNase 及 Nickase 等任何可能干扰诊断结果的杂质。这些高性能PCR试剂在原有基础上进一步纯化,并通过高灵敏度 qPCR 体系进行严格验证,显著降低假阳性或假阴性风险。其卓越品质依托于靶向 16S、18S 以及复制起始区的通用引物体系,可确保实时 PCR 反应中的精准扩增。

我们的RT-PCR试剂的DNA要求如下:

  • 原核DNA:≤1拷贝大肠杆菌gDNA使用通用16S引物,检测514,172个原核基因组。
  • 真核DNA:≤0.1拷贝的人类gDNA使用通用18s引物,检测110,032个真核基因组。
  • 质粒DNA:≤10个拷贝,使用复制引物的通用起源,检测25,920个独特质粒。

Ultra Pure JumpStartTaq DNA聚合酶:高性能解决方案

Ultra Pure JumpStart™ Taq DNA 聚合酶(UPJSTAQ)在严格的 MQ-300 标准下精制而成,将所有已知会干扰 PCR 检测的污染物降至极低水平。凭借这一高纯度,该酶能显著降低假阳性风险,是构建可靠分子诊断体系的核心原料。UPJSTAQ 保留了标准 JumpStart™ Taq(JSTaq)的卓越性能,并采用抗体热启动机制:抗体与酶形成复合物,有效抑制非特异性扩增,同时提升靶标产量。与手动热启动相比,这种即用型抗体-酶复合物操作更简便,污染风险也更低。

严格的UPJSTAQ DNA去除流程和测试方案确保不存在宿主来源DNA和环境污染物,这些污染物通常会在生产过程中引入。这些严格的规格确保不含DNA的Ultra Pure JumpStart™Taq不会干扰敏感分子测定。如图1所示,此功能对于保存珍贵的模板并显著减少无模板控件(NTC)中的扩增至关重要。

图表显示UPJSTaq在无模板对照(NTC)中的扩增效率降低,彰显高性能PCR试剂的卓越性能

图1:UPJSTaq显示无模板对照品(NTC)的扩增减少。

JSTaq 18S的RFU与循环次数关系图,显示了被遮蔽的NTCs和低丰度目标物,影响PCR分辨率。

图2:JSTaq不是为防止DNA污染而设计的,可能会遮盖NTCs和低丰度目标,影响低目标范围内的分辨率。

我们的标准JSTaq和PCR试剂不是专门为防止DNA污染而设计的,更加适合那些处于研究阶段的客户,在这些阶段DNA污染可能不是那么令人担忧。相反,我们的Ultra PURE产品可满足制造阶段客户的需求,在这些阶段,建议使用更加高纯的试剂和酶。

UPJSTAQ将NTC和低丰度目标变得难以区分的风险降至最低,这可能导致低目标范围内的分辨率丧失(见图2)。这种局限性会显著影响测定灵敏度。这正是使UPJSTAQ成为需要将误报和假阴性风险降至最低的诊断测定的理想选择。

通过选择Ultra Pure JumpStart™ Taq DNA聚合酶,科学家可以增强PCR扩增的可靠性,确保其结果在各种分子生物学应用(包括实时PCR仪器和RT-qPCR测定)中准确且可重现。

超纯PCR试剂:优化诊断检测解决方案

为在分子诊断中获得最高准确度,Ultra Pure JumpStart™ Taq DNA 聚合酶(UPJSTAQ)应与配套的 Ultra Pure PCR 缓冲系统联合使用。整套方案经过精细优化,可最大限度降低假阴性及假阳性风险。其中 10× PCR 缓冲液、MgCl₂ 及无 DNA 水均经特殊处理,彻底去除环境来源的 DNA,确保反应体系完整可靠。这些高灵敏度、高品质的 PCR 试剂可广泛清除各类 DNA 污染,避免对 qPCR、RT-PCR 等敏感检测造成干扰(见图 3)。

UMPCL2(16S)的RFU与循环次数关系图,展示了适用于高灵敏度检测的无DNA PCR试剂。

图3:不含DNA的PCR试剂在敏感检测中干扰概率更低。

其他市售MgCl₂(16S)的图谱,显示相对荧光单位(RFU)随循环次数的变化,突显受污染DNA导致的假阳性结果。

图4:其他MgCl2携带受污染的DNA时,误报的风险会增加。

确保无污染PCR扩增

不含 DNA 的 PCR 试剂至关重要:残留核酸会掩盖低丰度靶标、引发假阳性并降低诊断特异性。我们开发的高灵敏度 qPCR 检测方案正是为解决这些问题而设,确保仅使用最高品质的试剂进行扩增。如图 3 所示,无 DNA 试剂几乎不会对高敏检测造成干扰,是分子生物学实验准确可靠的关键保障。

PCR 添加剂可能携带污染 DNA 或核酸酶,进一步放大假阳性与假阴性风险(见图 4)。选用 Ultra Pure 超纯 PCR 试剂,可显著降低此类风险,提升诊断方案的可靠性,并确保RT- PCR 仪获得精准检测结果。

结论:推动分子诊断发展

综上所述,Ultra Pure JumpStart™ Taq DNA 聚合酶与 Ultra Pure PCR 试剂的问世,为分子诊断树立了新的里程碑。它们凭借严苛的纯化工艺将污染降至极低,显著提升 PCR 检测的可靠性与灵敏度。对品质的坚持不仅保障了 DNA 测序及其他分子生物学实验的精准度,也让诊断结果更具信心。

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