市售蛋白标记试剂盒让研究人员可以灵活定制自己的免疫检测panel。然而,由于许多实验方案需要在抗体标记前后置换缓冲液,因此透析工作流程非常耗时,且在多次转移样品期间会造成蛋白质大量损失。
为去除蛋白质标记应用中未掺入的标记,离心装置是一种快速、方便、高回收率的凝胶过滤替代方案。
将标记步骤与一体化 Amicon® Pro 系统纯化步骤相结合,可大幅提高抗体标记产量。Amicon® Pro 纯化系统是一种灵活适配的离心装置,融合了亲和纯化与下游样品浓缩和缓冲液置换步骤。
Amicon® Pro 系统的两大特质使其成为制备纯标记抗体的便捷设备:
有关 Amicon® Pro 抗体标记应用的详情,请访问我们专门的抗体标记页面以及相关文献(阅读我们 2015 年在《Journal of Immunological Methods》上发表的论文)
关于使用 Amicon® Pro 系统进行小规模抗体标记的实验方案概要,请见下文。
注意:除结合反应外,所有步骤均为离心法。除反向离心外,所有步骤都需要吊桶转子。
可选:使用 0.5 mL TBS-T 预湿设备。 1000 x g 离心 1 min。
为比较传统离心洗滤法和 Amicon® Pro 方法的标记抗体作用性能,将其检测能力与物种/物种 GAPDH 抗体检测对进行了对比。每次印迹使用相似量的一抗,两组生物素/SA 对均表现出与物种/物种抗体检测对相同乃至更高的(图 1)。
图 1.
抗GAPDH抗体使用 Amicon® Pro 系统进行生物素化,用于在蛋白质印迹中成功检测 GAPDH。取 EGF 刺激的 A431 细胞裂解液 (0.25-4 µg) 等分试样通过 SDS-PAGE 分离,转印到 Immobilon®-P 膜上,并使用各种间接检测对在 SNAP i.d.® 2.0 系统中探测 β 微管蛋白。所有情况下使用相同数量的一抗(GAPDH 特异性)。
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