培养基制备

培养基的制备

市售培养基有脱水或粉末状、液体浓缩液或工作液等形式。用于肉汤培养的脱水培养基需先用蒸馏水溶解，并在灭菌前调节最终pH值。用于琼脂培养的粉末状培养基必须先用蒸馏水溶解并搅拌，然后煮沸或高压灭菌，再采用无菌操作技术将其注入无菌培养皿中。 以液体浓缩液形式提供的培养基，必须在无菌条件下用蒸馏水稀释，调节pH值，并分装到无菌容器中保存。以工作液形式提供的培养基，在无菌过滤和/或无菌条件下加入所需的血清或其他补充剂，并加热至适宜细胞生长的温度后，即可直接使用。

培养基灭菌

由粉末制备的培养基在使用前必须通过过滤、加热或高压灭菌进行灭菌。尽管液体培养基通常以无菌且即用浓度的形式提供，但仍建议进行无菌过滤，特别是在使用前需添加血清或其他补充剂的情况下。灭菌后，应采用无菌操作技术处理培养基，以防止交叉污染或非目标微生物的生长。

培养基补充剂

某些细胞培养或调控所需的补充剂不稳定或不耐热；因此，必须由使用者在使用前将其添加到经热灭菌的基础培养基中。通常源自牛源的血清（FBS）是动物细胞培养基中常用的补充剂。某些细胞类型的生长可能需要激素、生长因子和特定的信号分子。IPTG等添加剂用于诱导蛋白质表达。 为控制细菌和真菌污染物的生长，也可向培养基中添加抗生素，不过通过妥善处理和储存培养基，污染问题通常也能得到有效控制。

培养基的储存与使用

市售及预制的培养基，无论是液体、浇注琼脂形式还是工作液，通常应在避光条件下于4 °C保存，以抑制机会性微生物的生长，并防止培养基成分因光照而降解。在接种细胞培养物之前，应将培养基加热至适合细胞生长的适当温度。