生物来源
rabbit
质量水平
克隆
polyclonal
种属反应性
mouse, human, rat
制造商/商品名称
RIPAb+
Upstate®
技术
RIP: suitable
immunocytochemistry: suitable
immunohistochemistry: suitable
immunoprecipitation (IP): suitable
western blot: suitable
NCBI登记号
UniProt登记号
运输
dry ice
基因信息
human ... ELAVL1(1994)
一般描述
RipAb+HuR组包括HuR抗体,阴性对照抗体(纯化的兔IgG)和阳性qPCR引物,可扩增人β肌动蛋白(ACTB)cDNA的100 bp片段。HuR和阴性对照抗体以可扩展的“每个RIP”反应大小提供,可用于功能验证沉淀HuR相关RNA。
免疫原
应用
使用0.5 μg正常兔IgG或抗HuR抗体对MCF7细胞的RIP裂解液(每个IP 2 X 106细胞当量)进行免疫沉淀。沉淀的蛋白质通过电泳分离,转移到硝酸纤维素膜上并用抗HuR(1.0 μg/mL)进行探测。
使用一步IP-Western试剂盒(GenScript目录号L00231)对蛋白质进行可视化(请参见图)。
蛋白质印迹分析:
通过电泳分离3T3/A31裂解液,转移到PVDF膜上,并用HuR,hu(1:500稀释度)探测。使用与HRP偶联的驴抗兔蛋白可视化,并使用化学发光检测系统可视化。(请参见图)。
免疫沉淀分析:
10 ug该抗体从500 ug 3T3/A31 RIPA裂解液中免疫沉淀的HuR(请参见图)。
免疫细胞化学分析:
使用抗HuR(红色)对HeLa,NIH/3T3进行共聚焦IF分析。肌动蛋白丝已用AlexaFluor 488-鬼笔环肽(绿色)标记。细胞核用DAPI(蓝色)染色(请参见图)。
外形
正常兔IgG。一个小瓶,包含125 μg纯化兔IgG,溶于125 μL含有0.1%叠氮化钠的储存缓冲液。在-20°C下储存。
RIP引物ACTB。一个小瓶,包含75 μL 5 μM人β肌动蛋白(ACTB)特异性引物。在-20°C下储存。
对于: TTG TTA CAG GAA GTC CCT TGC C
REV: ATG CTA TCA CCT CCC CTG TGT G
分析说明
使用5 µg正常兔IgG或抗HuR抗体和Magna RIP试剂盒(目录号17-700)对从HeLa细胞制备的RIP裂解液(每个IP 2 x 107细胞当量)进行免疫沉淀。
使用RIP引物ACTB通过qPCR确认了HuR相关RNA的成功免疫沉淀(请参见图)。
请参阅Magna RIP®(目录号17-700)或EZ-Magna RIP(目录号17-701)方案以获取实验详细信息。
包括阴性对照兔IgG抗体和人β肌动蛋白(ATCB)特异性对照引物。
法律信息
储存分类代码
12 - Non Combustible Liquids
闪点(°F)
Not applicable
闪点(°C)
Not applicable
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All eukaryotic organisms require tight regulation of gene expression for complex processes such as development, differentiation, cell specification, and responses to environmental stimuli. Many genes are regulated post-transcriptionally, in addition to transcriptional mechanisms of gene regulation. RNA-binding proteins (RBPs) are essential for post-transcriptional gene regulation, linking transcription and translation in many processes including transcription, splicing, export, rate of translation and turnover. In all of these events, RBPs coordinate regulation of the amount of protein produced from mRNA transcripts.
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