100 kDa

Ago2（argonaute-2），也称为真核翻译起始因子2C（EIF2C2），是siRNA定向RNA干扰（RNAi）反应的重要组成部分。Ago2是解开siRNA双链体和将siRNA组装成RNA诱导的沉默复合物（RISC）所需的核酸内切酶。Ago2通过其Piwi域与DICER1交互。该Piwi结构域被认为通过类似于RNase H的机制提供RNA切割活性。Ago2活性对于胚胎发育以及RNA介导的基因沉默（RNAi）是必需的。

KLH偶联的合成肽，包含序列YSGAGPALAPPAPPPPIQG。

RNA结合蛋白免疫沉淀（microRNA）：
使用5 µL正常小鼠IgG或5 µL抗Ago2抗体和Magna RIP^® RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒（目录号17-700)）对HeLa细胞制备的RIP裂解液（每个IP 2 X 10⁷ 细胞当量）进行免疫沉淀。
通过TaqMan microRNA分析，hsa-miR-23a验证了Ago2相关的microRNA的成功免疫沉淀。（请参见图）。
有关实验详细信息，请参阅Magna RIP（目录号17-700）或EZ-Magna RIP（目录号17-701）方案。


RIP裂解液的免疫沉淀：
代表性批次数据。使用0.5 µL正常小鼠IgG或抗Ago2抗体对从HeLa细胞制备的
RIP裂解液（每个IP 2 X 10⁶细胞当量）进行免疫沉淀。通过电泳分解沉淀蛋白（泳道1：小鼠IgG，泳道2：抗Ago2）和HeLa全细胞溶解产物（泳道3），转移至硝化纤维素上并通过抗Ago2抗体（1:5000稀释液）进行探查。
使用与HRP偶联的山羊抗小鼠二抗和化学发光检测系统对蛋白质进行可视化。
（请参见图）。

研究子类别
RNA 代谢&结合蛋白

RNA结合蛋白（RBP）

研究类别
表观遗传学&核功能

经RIPAb+ Ago2 -RIP验证的抗体&引物组方便地包括抗体 & 特异性对照PCR引物。

可识别Ago2。

每组10次测定。推荐用于：每个RIP约5 μL抗体（取决于生物学背景）。

抗-Ago2（小鼠单克隆IgG1κ）。一个小瓶，含有50 µL腹水（含0.05%叠氮化钠）。储存于-20°C。

正常小鼠IgG。一个小瓶，含有125 μg纯化小鼠IgG，溶于125 µL储存缓冲液（含0.1%叠氮化钠）中。在-20°C下储存。

RIP引物FOS。一个小瓶，包含75 μL 5 μM人FOS基因的特异性引物。在-20°C下储存。
对于： GAG AGC TGG TAG TTA GTA GCA TGT TGA
REV： AAT TCC AAT AAT GAA CCC AAT AGA TTA GTT A

自收到之日起，在 -20°C条件下可稳定保存1年。
处理建议：收到后，在取下瓶盖之前，将小瓶离心并轻轻混合溶液。分装到微量离心管中，并储存于-20°C。避免反复冻融循环，以免损坏IgG和影响产品性能

RNA结合蛋白免疫沉淀：
使用5 µL正常小鼠IgG或5 µL抗Ago2抗体和Magna RIP^® RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒（目录号17-700）对HeLa细胞制备的RIP裂解液（每IP 2 X 10⁷细胞当量）进行免疫沉淀。
使用RIP引物FOS通过qPCR验证了Ago2相关RNA的成功免疫沉淀（请参见图）。
有关实验详细信息，请参阅Magna RIP（目录号17-700）或EZ-Magna RIP（目录号17-701）方案。

对照
包括阴性对照小鼠IgG抗体和对人FOS特异性的对照引物。

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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