ChIPAb+ CTCF - ChIP经验证的抗体和引物组

CTCF，也称为CCCTC结合因子，包含11个锌指（ZF）结合域，使其能够结合不同的DNA靶序列和蛋白质。这种多功能蛋白可以用作转录激活因子或阻遏因子。转录阻遏因子，CTCF，可与脊椎动物c-myc基因的启动子结合。它还与PLK和PIM1启动子结合。CTCF可能阻止转录激活因子与增强子结合。CTCF还可充当APP的转录激活因子。它涉及基因调控的不同方面，包括启动子激活或抑制、激素反应性基因沉默、甲基化依赖性染色质绝缘和基因组印迹。该基因中CTCF的突变与浸润性乳腺癌，前列腺癌和Wilms肿瘤有关，这表明CTCF可能起抑癌作用。

对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物（通过qPCR对每个批次进行检测），以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体，以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+ CTCF组包括CTCF抗体，阴性对照抗体（正常小鼠IgG）和qPCR引物，可扩增人H19内部对照区域的165 bp区域。CTCF和阴性对照抗体以可扩展的“每个ChIP”反应大小提供，可用于功能上验证与 CTCF相关染色质的沉淀。

可识别CTCF，Mr ~130 kDa。

带His标签的重组蛋白，对应于人CTCF。

染色质免疫沉淀：
使用2 µg正常小鼠IgG或2 µg抗CTCF和Magna ChIP G试剂盒（目录编号17-611）对从HeLa细胞制备的超声染色质（每个IP 1 X 10⁶细胞当量，固定15分钟）进行染色质免疫沉淀。
使用ChIP引物，人H19 ICR作为阳性基因座和代表性的已发表的阴性基因座，通过qPCR验证了CTCF相关DNA片段的成功免疫沉淀（Wendt, K.S., et al., 2008）（请参见图）。 数据表示为每个IP样品相对于每个扩增子和ChIP样品的输入染色质的输入百分比。
请参阅EZ-Magna ChIP A（目录号17-408）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案以获取实验详细信息。

蛋白质印迹分析：
代表性批次数据。
K562细胞裂解液通过电泳分离，转移至PVDF膜上，并用抗CTCF，克隆1.2.1.5.4（1 μg/mL）进行探测。
使用与HRP偶联的山羊抗小鼠和化学发光检测系统对蛋白质进行可视化（请参见图）。

文献中报道了以下分子量：180 kDa（CTCF-180），130 kDa（CTCF-130），82 kDa（CTCF-82），70 kDa（CTCF-70）。有关更多详细信息，请参见Klenova, E.M., et al, (1997) Nucleic Acids Res. 25, 466–473 and Torrano,V., et al, (2006) Journal of Cell Science 119, 1746-1759) 。
有关更多信息，请参见分子量部分。

ChIPAb+ CTCF组包括CTCF抗体，阴性对照抗体（正常小鼠IgG）&qPCR引物，可扩增人H19内部对照区域的165 bp区域。

染色质免疫沉淀：
使用2 µg正常小鼠IgG或2 µg抗CTCF和Magna ChIP^® G试剂盒（目录编号17-611）对从HeLa细胞制备的超声染色质（每个IP 1 X 10⁶细胞当量，固定15分钟）进行染色质免疫沉淀。 使用ChIP引物人H19 ICR通过qPCR验证了CTCF相关DNA片段的成功免疫沉淀（请参见图）。
有关实验详细信息，请参阅EZ-Magna ChIPA（目录号17-408）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案。

~ 130 kDa
注释： 聚（ADP-核糖基）化同工型，C端截短或SUMO化会导致CTCF蛋白在SDS–PAGE上发生可变迁移，这可能会在蛋白质印迹上使CTCF具有不同的分子量。修饰取决于细胞类型和生长条件。
文献报道了以下分子量：180 kDa（CTCF-180），130 kDa（CTCF-130），82 kDa（CTCF-82），70 kDa（CTCF-70）。有关更多详细信息，请参见Klenova,E.M.,et al, (1997) Nucleic Acids Res. 25, 466–473 and Torrano,V,et al, (2006) Journal of Cell Science 119, 1746-1759)。

形式：纯化

抗-CTCF，（小鼠单克隆IgG1κ。一个小瓶，包含50 μg蛋白G纯化的小鼠单克隆IgG1κ，溶于含0.1 M Tris-甘氨酸（pH值7.4，150 mM NaCl）和0.05%叠氮化钠的缓冲液中，然后添加甘油至30%。储存于-20°C。

正常小鼠IgG。两个小瓶，包含25 µg纯化IgG，溶于25 µL储存缓冲液（含0.1%叠氮化钠）中。储存于-20°C。

ChIP引物，人H19 ICR。一个小瓶，包含75 μL 5 μM人H19内部对照区域特异性引物。储存于-20°C。
对于：CCC ATC TTG CT GACC TCAC
REV: AGA CCT GGG ACG TTT CTG TG

对照
包括阴性对照小鼠IgG抗体和人H19 ICR特异性引物。

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany