CN
17-10195
ProteoExtract® 细胞骨架富集和分离试剂盒
This kit provides cytoskeleton purification detergent buffers, sufficient for extraction from ten 100 mm culture dishes, that retain focal adhesion & actin-associated proteins while removing soluble cytoplasmic & nuclear proteins from the cell.
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eCl@ss:
32161000
制造商/商品名称
Chemicon®
ProteoExtract®
技术
western blot: suitable
运输
dry ice
一般描述
阅读《自然方法》中的应用说明！
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8624.pdf
（单击此处！）
重新发现肌动蛋白的细胞骨架：美国UCSD莫里斯癌症中心Richard Klemke博士发现了细胞迁移的新技术。
肌动蛋白细胞骨架是由肌动蛋白聚合物和多种相关蛋白组成的高度动态网络。肌动蛋白细胞骨架的功能是介导全部真核细胞中的各种基本生物学功能，包括细胞内和细胞外运动和结构
支持（Chen，C.S.，et al.，2003；Frixione E.，2000）。为了执行这些功能，必须在时间和空间上严格调节肌动蛋白细胞骨架的组织。因此，与肌动蛋白细胞骨架相关的许多蛋白质可能是控制肌动蛋白组装的信号通路的靶标。肌动蛋白的细胞骨架组装在多个水平上受到调节，包括将肌动蛋白单体（G-肌动蛋白）组织成肌动蛋白聚合物以及将肌动蛋白聚合物超组织成丝状网络（F-肌动蛋白–是微丝的主要成分）（Bretscher，a.，et al.，1994）。肌动蛋白聚合物向丝状网络的这种超组织是由肌动蛋白侧结合或交联蛋白介导的（Dubreuil，R.R.，1991；Matsudaira，P.，1991；Matsudaira，P.，1994）。肌动蛋白的细胞骨架是一种动态结构，可响应刺激和细胞周期进程而迅速改变形状和组织。因此，其正常调节的破坏可能导致细胞转化和癌症。已显示转化的细胞比未转化的细胞含有更少的F-肌动蛋白，并且在整个细胞周期中表现出非典型的F-肌动蛋白水平协调（Rao，J.Y.，et al.，1990）。因此，肌动蛋白丝在细胞内的取向分布是细胞形状和运动性的重要决定因素。
局灶性粘连和粘附连接是膜相关复合物，可作为肌动蛋白丝的成核位点以及细胞外部，质膜和肌动蛋白细胞骨架之间的交联剂（Yamada，K.M.，Geiger，B.，1997）。粘着斑的功能是结构性的，将外部的ECM与内部的肌动蛋白细胞骨架联系起来。它们也是信号转导的位点，响应粘连而启动信号传导途径。粘着斑由附着在细胞外基质上的整联蛋白型受体组成，并与含有纽蛋白（通用粘着粘连标记），talin，α-肌动蛋白，桩蛋白，张力蛋白，斑联蛋白和粘着斑激酶（FAK）的蛋白复合物在细胞内相关（Burridge, K., et al., 1990; Turner, C.E., Burridge, K., 1991）。
传统上，由于细胞骨架在诸如Triton-X100等传统去污剂中的不溶性，研究与肌动蛋白细胞骨架相关并调节肌动蛋白细胞骨架的蛋白质一直很困难。多年来的工作表明，许多肌动蛋白调节蛋白/磷酸蛋白在激活后会从可溶性细胞质区室转移到不溶性肌动蛋白细胞骨架。这些重要蛋白质的不溶性使得难以研究其与肌动蛋白结合后的生化变化，例如磷酸化和亚硝基化。迫切需要一种细胞骨架纯化方法，该方法可以选择性富集与细胞骨架相关的蛋白质，以进行详细的蛋白生化分析。这种方法将提供直接研究正常和患病细胞骨架中这一重要蛋白质库的手段。
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8624.pdf
（单击此处！）
重新发现肌动蛋白的细胞骨架：美国UCSD莫里斯癌症中心Richard Klemke博士发现了细胞迁移的新技术。
肌动蛋白细胞骨架是由肌动蛋白聚合物和多种相关蛋白组成的高度动态网络。肌动蛋白细胞骨架的功能是介导全部真核细胞中的各种基本生物学功能，包括细胞内和细胞外运动和结构
支持（Chen，C.S.，et al.，2003；Frixione E.，2000）。为了执行这些功能，必须在时间和空间上严格调节肌动蛋白细胞骨架的组织。因此，与肌动蛋白细胞骨架相关的许多蛋白质可能是控制肌动蛋白组装的信号通路的靶标。肌动蛋白的细胞骨架组装在多个水平上受到调节，包括将肌动蛋白单体（G-肌动蛋白）组织成肌动蛋白聚合物以及将肌动蛋白聚合物超组织成丝状网络（F-肌动蛋白–是微丝的主要成分）（Bretscher，a.，et al.，1994）。肌动蛋白聚合物向丝状网络的这种超组织是由肌动蛋白侧结合或交联蛋白介导的（Dubreuil，R.R.，1991；Matsudaira，P.，1991；Matsudaira，P.，1994）。肌动蛋白的细胞骨架是一种动态结构，可响应刺激和细胞周期进程而迅速改变形状和组织。因此，其正常调节的破坏可能导致细胞转化和癌症。已显示转化的细胞比未转化的细胞含有更少的F-肌动蛋白，并且在整个细胞周期中表现出非典型的F-肌动蛋白水平协调（Rao，J.Y.，et al.，1990）。因此，肌动蛋白丝在细胞内的取向分布是细胞形状和运动性的重要决定因素。
局灶性粘连和粘附连接是膜相关复合物，可作为肌动蛋白丝的成核位点以及细胞外部，质膜和肌动蛋白细胞骨架之间的交联剂（Yamada，K.M.，Geiger，B.，1997）。粘着斑的功能是结构性的，将外部的ECM与内部的肌动蛋白细胞骨架联系起来。它们也是信号转导的位点，响应粘连而启动信号传导途径。粘着斑由附着在细胞外基质上的整联蛋白型受体组成，并与含有纽蛋白（通用粘着粘连标记），talin，α-肌动蛋白，桩蛋白，张力蛋白，斑联蛋白和粘着斑激酶（FAK）的蛋白复合物在细胞内相关（Burridge, K., et al., 1990; Turner, C.E., Burridge, K., 1991）。
传统上，由于细胞骨架在诸如Triton-X100等传统去污剂中的不溶性，研究与肌动蛋白细胞骨架相关并调节肌动蛋白细胞骨架的蛋白质一直很困难。多年来的工作表明，许多肌动蛋白调节蛋白/磷酸蛋白在激活后会从可溶性细胞质区室转移到不溶性肌动蛋白细胞骨架。这些重要蛋白质的不溶性使得难以研究其与肌动蛋白结合后的生化变化，例如磷酸化和亚硝基化。迫切需要一种细胞骨架纯化方法，该方法可以选择性富集与细胞骨架相关的蛋白质，以进行详细的蛋白生化分析。这种方法将提供直接研究正常和患病细胞骨架中这一重要蛋白质库的手段。
应用
EMD Millipore ProteoExtract®细胞骨架富集和分离试剂盒提供了足以从10个100 mm培养皿中提取的细胞骨架纯化洗涤剂缓冲液，可保留局灶性粘连肌动蛋白相关蛋白，同时从细胞中去除可溶性细胞质核蛋白。在蛋白质印迹分析中，分别提供了抗波形蛋白和抗GAPDH抗体作为细胞骨架和胞质溶胶的标记。该试剂盒将大大提高检测和研究低丰度肌动蛋白相关蛋白的能力，这些蛋白通常在全细胞裂解物的常规蛋白质印迹分析方法中被掩盖。
研究子类别
细胞骨架
细胞骨架
研究类别
细胞结构
细胞结构
该试剂盒提供了足以从10个100 mm培养皿中提取的细胞骨架纯化洗涤剂缓冲液，可保留局灶性粘连&肌动蛋白相关蛋白，同时从细胞中去除可溶性细胞质&核蛋白。
包装
足够用于15次反应/分离的试剂
组分
一瓶含1.9 mL 10x细胞提取缓冲液
一瓶含3.5 mL 20x细胞骨架清洗缓冲液
一瓶含9 mL即用型核提取缓冲液
两瓶含100 μL 1000x蛋白酶抑制剂混合溶液
一瓶含150 μL 1000x原钒酸钠溶液
一瓶含3.8 mL即用型细胞骨架溶解缓冲液
一瓶含30 µL 2000×山羊抗小鼠HRP偶联物
一瓶含50 µL 1000x抗GAPDH小鼠单克隆IgG1抗体
一瓶含100 µL 500x抗波形蛋白小鼠单克隆IgG1抗体
一瓶含3.5 mL 20x细胞骨架清洗缓冲液
一瓶含9 mL即用型核提取缓冲液
两瓶含100 μL 1000x蛋白酶抑制剂混合溶液
一瓶含150 μL 1000x原钒酸钠溶液
一瓶含3.8 mL即用型细胞骨架溶解缓冲液
一瓶含30 µL 2000×山羊抗小鼠HRP偶联物
一瓶含50 µL 1000x抗GAPDH小鼠单克隆IgG1抗体
一瓶含100 µL 500x抗波形蛋白小鼠单克隆IgG1抗体
储存及稳定性
将未打开的试剂盒模块（17-10195-1 & 17-10195-2）保持在指定温度下。该试剂盒接收后最多可使用4个月。避免重复冻融循环，必要时分装。
法律信息
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
PROTEOEXTRACT is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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Opposing roles of ZEB1 in the cytoplasm and nucleus control cytoskeletal assembly and YAP1 activity.
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Analytical biochemistry, 446, 102-107 (2013-10-29)
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