ChIPAb+ REST - ChIP经验证的抗体和引物组

对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物（通过qPCR对每个批次进行检测），以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体，以确保ChIP反应的特异性。

ChIPAb+ REST组包括REST抗体，正常兔IgG和扩增人Snap25启动子89 bp区域的对照引物。REST和阴性对照以可扩展的“每个ChIP”反应大小提供，可用于功能上验证与REST相关染色质的沉淀。

预测值为120 kDa，观测值为200 kDa

表位：氨基酸801-1097

针对对应于人REST的氨基酸801-1097的GST融合蛋白制备REST纯化的抗体。

染色质免疫沉淀：
使用4 µg正常兔IgG（产品编号PP64B）或4 µg抗REST（产品编号CS207378）和Magna ChIP HiSens（目录编号17-10460）对从HeLa细胞制备的超声染色质（每个IP 4e6细胞当量）进行染色质免疫沉淀。 使用ChIP引物，人Snap25（产品编号CS207379）作为阳性基因座，并使用CDC25作为阴性基因座，通过qPCR验证了REST相关DNA片段的成功免疫沉淀。 （图2）。 数据表示为每个IP样品相对于每个扩增子和ChIP样品的输入染色质的输入百分比。

蛋白质印迹分析：
通过电泳分离人HEK293细胞裂解液（30 ug），转移到PVDF膜上并用抗REST（1:1000稀释度）探测。 使用与HRP偶联的二抗和化学发光检测系统对蛋白质进行可视化。 数据由俄勒冈州波特兰市俄勒冈健康与科学大学Gail Mandel的Glen Corson实验室提供。
REST的预测分子量为125 kDa。观察到的大小为~200 kDa。

研究子类别
染色质生物学

组蛋白

研究类别
表观遗传学&核功能

该ChIPAb+REST -ChIP验证的抗体 & 引物组方便地包括抗体 & 特异性对照PCR引物。

可识别REST，预测MW为125kDa，观测值为200 kDa。

每组25次测定。推荐用于：每个染色质免疫沉淀约2 μg抗体（取决于生物学背景）。

形式：纯化

抗-REST（兔多克隆）。 一个小瓶，包含100 µL 1.0 mg/mL纯化的兔多克隆，溶于含有0.014 M磷酸盐缓冲液（pH 7.6）、0.175 M NaCl、0.07％叠氮化钠和30％甘油的缓冲液中。 储存于-20°C。

正常兔IgG。一个小瓶，包含125 µg兔IgG，溶于125 µL含有0.05%叠氮化钠的储存缓冲液中。 储存于-20°C。

ChIP引物，人Snap25。一个小瓶，包含75 μL 5 μM人Snap25启动子特异性引物。储存于-20°C。
对于： AGA CTC CTT TGC AGA CAA TTT CCT
REV: CAA CAC AGA AGA TTT CCA CAA GTA GAC

自收到之日起在-20°C可稳定保存1年。处理建议：第一次融化后，在取下瓶盖之前，将小瓶离心并轻轻混合溶液。分装到微量离心管中，并储存于-20°C。避免反复冻融循环，以免损坏IgG和影响产品性能。

对照
包括正常兔IgG和对人SNAP25特异的引物。

染色质免疫沉淀：
使用4 µg正常兔IgG（产品编号PP64B）或4 µg抗REST（产品编号CS207378）和Magna ChIP^® HiSens试剂盒（目录编号17-10460）对从HeLa细胞制备的超声染色质（每个IP 4e6细胞当量）进行染色质免疫沉淀。 使用ChIP引物，人Snap25，通过qPCR验证了REST相关DNA片段的成功免疫沉淀。

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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