ChIPAb+ EZH2，克隆AC22 - ChIP经验证的抗体和引物组

EZH2是polycomb基团（PcG）蛋白，是PRC2/EED-EZH2复合物的催化亚基，可甲基化组蛋白H3的′Lys-9′（H3K9me）和′Lys-27′（H3K27me），从而导致受影响靶标的转录抑制基因。能够对组蛋白H3的′Lys-27′进行单甲基、二甲基和三甲基化，分别形成H3K27me1，H3K27me2和H3K27me3。与含有EZH2的复合物相比，它在胚胎干细胞中更为丰富，并且在形成H3K27me3中起主要作用，这是胚胎干细胞识别和适当分化所必需的。PRC2/EED-EZH2复合物也可以用作DNA甲基转移酶的募集平台，从而连接两个表观遗传抑制系统。PRC2/EED-EZH2复合物抑制的基因包括HOXC8，HOXA9，MYT1，CDKN2A和视黄酸靶基因。EZH2还可以甲基化非组蛋白，例如转录因子GATA4和核受体RORA。通过在昼夜节律基因的启动子处的组蛋白甲基化来调节昼夜节律时钟。对于CLOCK-ARNTL/BMAL1异二聚体对CRY1/2介导的PER1/2转录激活的抑制至关重要；参与PER1/2启动子上组蛋白H3的′Lys-27′的二甲基化和三甲基化，这是CRY1/2蛋白抑制转录所必需的。

~85 kDa

对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物（通过qPCR对每个批次进行检测），以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体，以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+EZH2，克隆AC22抗体/引物组包括EZH2，克隆AC22抗体，阴性对照抗体（纯化的小鼠IgG）和qPCR引物，可扩增人MYT-1基因启动子内的135 bp区域。EZH2，克隆AC22抗体和阴性对照抗体以可扩展的“每个RIP”反应大小提供，可用于功能上验证与EZH2相关的染色质的沉淀。

表位：氨基酸353-451

针对对应于人EZH2的氨基酸353-451的GST融合蛋白制备EZH2，克隆AC22纯化的抗体。

染色质免疫沉淀：
代表性批次数据。
使用1 µg正常小鼠IgG或抗EZH2，克隆AC22抗体和Magna ChIP G试剂盒（目录编号17-611）对从HeLa S3细胞制备的超声染色质（每个IP 4 X 10⁶细胞当量）进行染色质免疫沉淀。
使用GAPDH启动子（阴性）和MYT-1启动子（阳性）引物，通过qPCR验证了EZH2相关DNA片段的成功免疫沉淀（请参见图）。 数据表示为每个IP样品相对于每个扩增子和ChIP样品的输入染色质的输入百分比。
请参阅EZ-Magna G ChIP（目录号17-409）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案以获取实验详细信息。

免疫沉淀分析：
代表性批次数据。
HeLa核细胞提取物用抗EZH2，克隆AC22或小鼠IgG免疫沉淀，然后通过电泳分离，转移至PVDF并用抗EZH2，克隆BD43（目录号05-1319）（1:1000稀释）探测。
使用与HRP偶联的山羊抗小鼠二抗（目录号AP124P）和化学发光检测系统对蛋白质进行可视化
（请参见图）。
泳道1：Hela核提取物与抗EZH2，克隆AC22免疫沉淀。
泳道2： HeLa核提取物与IgG免疫沉淀。

EZH2，克隆AC22，ChIP验证的抗体&引物组包括ChIP级抗体&用于EZH2染色质免疫沉淀的特异性对照PCR引物。

研究子类别
染色质生物学

研究类别
表观遗传学&核功能

细胞凋亡&癌症

未经其他物种测试。该免疫原序列在广泛的动植物物种中是相同的，因此预期有广泛的交叉反应性。。

识别EZH2，MW：~85-100 kDa。

每组25次测定。推荐用于：每个染色质免疫沉淀约2 μg抗体（取决于生物学背景）。

EZH2，克隆AC22（小鼠单克隆IgG2a）。一个小瓶含有50 μg蛋白G纯化抗体，溶于含有0 1M 三-甘氨酸，0.15M NaCl，0.05%叠氮化钠的50 μL缓冲液中，pH7.4，然后添加甘油至30%。储存于-20°C。

正常小鼠IgG。两个小瓶，每个包含25 μg纯化小鼠IgG，溶于25 μL储存缓冲液（含0.1%叠氮化钠）中。储存于-20°C。

ChIP引物MYT-1启动子区。一个小瓶含有75 μL的5 μM人MYT-1启动子区特异性引物。储存于-20°C。
对于：ACA AAG GCA GAT ACC CAA CG
REV: GCA GTT TCA AAA AGC CAT CC

形式：纯化

自收到之日起在-20°C可稳定保存1年。处理建议：第一次融化后，在取下瓶盖之前，将小瓶离心并轻轻混合溶液。分装到微量离心管中，并储存于-20°C。避免反复冻融循环，以免损坏IgG和影响产品性能。

对照
包括阴性对照小鼠IgG抗体和对人MYT-1启动子区域具有特异性的引物。

染色质免疫沉淀：
使用2 µg正常小鼠IgG或抗EZH2，克隆AC22抗体和Magna ChIP^® G试剂盒（目录编号17-611）对从HeLa S3细胞制备的超声染色质（每个IP 4 X 10⁶细胞当量）进行染色质免疫沉淀。 使用对照引物通过qPCR验证了EZH2相关DNA片段的成功免疫沉淀（请参见图）。
有关实验详细信息，请参阅EZ-Magna ChIPG（目录号17-409）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案。

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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