抗磷酸组氨酸（pHis）

依赖于组氨酸磷酸化蛋白质的变量。

磷酸化在调节蛋白活性和细胞中各种细胞信号事件中起重要作用。受磷酸组氨酸（pHis）检测工具的限制，大多数研究集中在丝氨酸，苏氨酸和酪氨酸磷酸化上。组氨酸磷酸化可发生在咪唑环的N1（1-pHis）或N3（3-pHis）处。稳定的pHis磷酸三唑基丙氨酸类似物（pTza和pPza）的开发可产生用于研究信号事件中组氨酸N1和N3磷酸化的抗体。越来越多的证据表明His激酶与癌症和肿瘤转移有关，第一个鉴定出的转移抑制基因是两种已知的哺乳动物His激酶Nm23-H1（也称为NME1，核苷二磷酸激酶或NDPK-A）之一。Nm23-H1/NME1和密切相关的Nm23-H2（NME2/NDPK-B）通过1-pHis酶中间体催化磷酸盐从ATP转移到核苷二磷酸（NDP）上。Nm23-H1/-H2也具有His激酶活性，可将磷酸盐从活性位点pHis转移到靶蛋白中的His上。诸如磷酸甘油酸变位酶（PGAM），琥珀酰辅酶A合成酶（SCS）和ATP柠檬酸裂合酶（ACL）之类的代谢酶也使用pHis作为酶中间体。与NME1/2不同，PGAM使用3-pHis作为酶中间体。除真核细胞外，组氨酸磷酸化在涉及趋化性的细菌双组分信号通路中也有充分的文献记载，尽管磷酸盐从受体/传感性蛋白中形成的pHis转移到受体反应调节蛋白的Asp残基上，并且受体/传感性蛋白本质上起门冬氨酸激酶的作用。

KLH偶联的不可水解的磷酸组氨酸类似物4-磷酸吡唑-2-基丙氨酸（pPza）。

斑点印迹分析：来自代表性批次的1：1,200稀释液检测到5µg pHis-和pPza-偶联的BSA，但未检测到His-、pTyr-、pSer-或pThr-偶联的BSA（由Bezaleel Mambwe, Richmond Muimo and RFW Jackson, Department of Infection, Immunity and Cardiovascular Disease/ Department of Chemistry, University of Sheffield, UK提供）

。蛋白质印迹分析：代表性批次的1：120稀释液在绵羊气管胞质提取物和人细胞裂解物（包括16HBE14o-，HEK293T，THP-1和THP-1衍生的巨噬细胞）中检测到具有组氨酸磷酸化的蛋白质（由Bezaleel Mambwe, Richmond Muimo and RFW Jackson, Department of Infection, Immunity and Cardiovascular Disease/ Department of Chemistry, University of Sheffield, UK提供）。

ELISA分析：代表性批次检测到pHis-和pPza-，但未检测到pTyr-、pSer-、pThr-、偶联的BSA或未偶联的BSA（Lilley, M., et al. (2015).Chem. Commun.(Camb).51(34):7305-7308).

免疫沉淀分析：代表性批次免疫沉淀绵羊气道上皮细胞提取物中组氨酸磷酸化的蛋白（Lilley, M., et al. (2015).Chem. Commun.(Camb).51(34):7305-7308）。

蛋白质印迹分析：代表性批次在16HBE14o-人支气管上皮细胞裂解物和绵羊气道上皮细胞提取物中检测到组氨酸磷酸化的蛋白。裂解物的酸处理（0.1 M HCl或0.4 M乙酸/0.1 M羟胺）而非碱（0.1 M NaOH）处理消除了靶条带检测（Lilley, M., et al. (2015).Chem. Commun.(Camb).51(34):7305-7308）。

蛋白质印迹分析：代表性批次检测到来自绵羊气道上皮细胞提取物的免疫沉淀NDPK-A/B以及来自16HBE14o-人支气管上皮细胞裂解物的G-R/M的组氨酸磷酸化（Lilley, M., et al. (2015).Chem. Commun.(Camb).51(34):7305-7308）。

注意：磷酸组氨酸检测前请勿加热样品。组氨酸磷酸化对热和酸不稳定。为生成特异性试验的阴性对照，可将等分样品在95ºC下加热10-15分钟，以逆转组氨酸磷酸化。或者，可以将等分样品在酸化pH值中于37ºC培养15分钟，以减少组氨酸磷酸化。培养前用25 µL 1M HCl酸化各100 µL样品，然后在磷酸组氨酸检测前用25 µL 1M NaOH中和。

用此兔多克隆抗磷酸组氨酸（pHis）目录号ABS1670检测组氨酸磷酸化，该抗体经验证可用于斑点印迹，ELISA，免疫沉淀和蛋白质印迹。

研究类别
信号传导

该兔多克隆抗体与pHis-和pPza-偶联的BSA反应，但不与His-，pTyr-，pSer-或pThr-偶联的BSA反应。使用N1-pHis类似物进行的特异性测试显示出最小的交叉反应性。

靶标修饰不是物种特异性的。

亲和纯化。

纯化的兔多克隆抗体，溶于含有100 mM 甘氨酸 pH 2.2、100 mM Tris pH 10和0.05％叠氮化钠的缓冲液中。

自收到之日起，在 2-8°C 条件下可稳定保存1年

通过蛋白质印迹法对 HEK293 细胞裂解液进行了评估。

蛋白质印迹分析：该抗体的1：200的稀释液在10 µg HEK293细胞裂解物中检测到组氨酸磷酸化蛋白。

浓度：请参考特定批次的数据表。

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