uPA活性检测试剂盒

尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）是一种分子量为52 kDa的丝氨酸蛋白酶，与许多生理和病理过程有关，包括组织重塑1，血管生成2，纤维蛋白溶解和肿瘤扩散。 当与细胞表面受体结合时，uPA从单链形式uPA转化为活性2链HMW-uPA。 uPA通过纤溶酶原和基质金属蛋白酶3的级联反应在基底膜降解中发挥作用。 已证明uPA抑制剂可减缓原发性肿瘤的生长和转移4-7。

CHEMICON uPA活性测定试剂盒为uPA活性的评估和uPA抑制剂的筛选提供了快速，有效和灵敏的系统。 该测定法是比色法，不需要放射性或荧光设备。 该测定法在0.05-50单位uPA活性范围内灵敏。

检测原理：

CHEMICON uPA活性测定试剂盒利用被活性uPA裂解的发色底物。 将该底物添加到含有uPA的样品中会产生有色产物，可通过其在405 nm（OD405）处的光学密度检测到。

应用：

CHEMICON uPA检测试剂盒是在纯化制剂和细胞培养以及存在病理状况（例如脓毒症）的血清中uPA活性测量的理想选择。 该测定法还可用于筛选uPA酶活性的抑制剂。

每个CHEMICON uPA活性测定试剂盒均包含足以评估96个样品的试剂，其中包括来自人尿液的uPA作为阳性对照。 建议使用一式两份或一式三份样品。

CHEMICON uPA活性测定试剂盒仅供研究使用；不适用于诊断或治疗应用。

关于uPA活性测定样品制备的注释。



血浆： 对肘静脉进行静脉穿刺，至少休息10分钟后，血瘀最小。 丢弃前几毫升血液。 在聚碳酸酯管中，用一体积冷却的0.11 mol/L枸橼酸钠采集9体积血液，轻轻混合并置于冰上。 随后，在冷冻离心机（30 min，2000g）中离心制备贫血小板血浆。 快速冷冻0.3 mL至0.6 mL血浆样品，并储存于-60℃。使用前，将血浆在37℃水浴中迅速解冻，置冰上。



组织： 关于从组织中提取uPA的出版物很多。 从膜级分中提取uPA的合适缓冲液需要Triton X100。 非洗涤剂提取物（也称为胞质级分）不需要Triton，但是通过超速离心去除膜级分，因此仅通过测量胞质溶胶即可忽略与膜级分相关的uPA活性。有关描述UPA提取程序的一些参考文献，请参见同行评审论文。

细胞培养： 分离细胞培养上清，直接使用。

研究类别
细胞结构

将试剂盒材料在-20°C下保存长达6个月。 复溶后，uPA阳性对照储存于-70°C，底物储存于2-8°C。

uPA阳性对照：（部件号90058）一个冻干小瓶，1000个单位，来自人尿的uPA。

显色底物：（部件号90057）一瓶5 mg含pNA组的三肽。

分析缓冲液，10X：（部件号90091）一个5 mL瓶。

灵敏度：一个单位定义为与Johnson等人的纤溶方法测试的国际标准相当的酶量{Johnson, A.J., et al. 1969.Thromb.Diath.Haemorrh.21, 259.}

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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