ChemiScreen 膜制剂
重组人EP4前列腺素受体

人EP4

前列腺素是由环氧合酶作用，经异构酶和合成进一步修饰而产生的一系列花生四烯酸代谢产物。 细胞在合成后迅速分泌前列腺素，随后前列腺素与8个GPCR家族结合以发挥其生物学作用（Narumiya and FitzGerald, 2001）。 前列腺素PGE2引起疼痛，血管舒张，T细胞免疫抑制，骨骼重塑并促进癌变。 四个相关的GPCR，EP1，EP2，EP3和EP4，各自与PGE2结合，但是每个受体的不同G蛋白偶联状态导致不同的生物学作用。 EP4主要与Gs偶联以增加细胞内cAMP水平。 在新生儿发育期间，EP4参与动脉导管的闭合，这是将循环从胎盘转换到肺所需的过程（Nguyen et al.，1997）。 此外，EP4通过促进成骨发生介导PGE2诱导的骨形成，选择性EP4激动剂正在被评估为骨质疏松症的潜在治疗方法（Yoshida et al.，2002）。 Chemicon′s EP4膜制剂是由我们专有的稳定重组细胞系制成的粗制膜制剂，可确保高水平的GPCR表面表达；因此，它们是用前列腺素E2筛选EP4各种相互作用拮抗剂的理想HTS工具。 膜制剂对[³H]-前列腺素E2的Kd为1.27-1.85 nM。 使用5 µg/孔的EP4膜制剂和1.5 nM[³H]-前列腺素E2，可获得大于3倍的信背比。

放射性配体结合测定和GTPγS结合。

GPCR 类别：A

蛋白质靶标：EP4

靶标亚家族：前列腺素类

质量标准：
信号：使用不同量的EP4膜制备物在竞争结合试验中获得的背景和特异性结合值：

	10µ g/孔
信号：背景	3.9
特异性结合（cpm）	643

1单位=10 µg膜制备物
Bmax：16.1 pmol/mg
Kd： 1.57 nM

诱导条件
将膜与放射性配体和未标记竞争剂（检测浓度见图1和2）在非结合96孔板的结合缓冲液中混合，并培养1-2小时。过滤前，用0.33%聚乙烯亚胺包被GF/C 96孔滤板30分钟，然后用50mM HEPES，pH值7.4，0.5%BSA洗涤。 将结合反应物转移到滤板上，并用洗涤缓冲液洗涤3次（每次洗涤每孔1 mL）。 将平板干燥并计数。

结合缓冲液：50 mM Hepes，pH值7.4，5 mM MgCl₂，1 mM CaCl₂，0.2%BSA，过滤并储存在4°C
放射性配体：[³H]前列腺素E2（Perkin Elmer#NET428）
洗涤缓冲液：50 mM Hepes，pH值7.4，500mM NaCl，0.1%BSA，过滤并在4°C下保存。

一个包装包含足以进行至少200次测定（单位）的膜，其中单位是产生大于3倍信号：背景的膜量，具有在1.5 nM的3H标记的前列腺素E2。

包装缓冲液中的液体：50 mM Tris pH值7.4、10%甘油和1%BSA，不含防腐剂。
包装方法：将膜蛋白在包装缓冲液中调节至指定的浓度，快速冷冻，并保存在-80°C下。

在 -70°C 下可冷冻保存长达 2年。 请勿冷冻和解冻。

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