抗-LAG3抗体，克隆4-10-C9

淋巴细胞活化基因3蛋白（UniProt Q61790；也称为CD223、LAG-3）由鼠物种的Lag3基因（基因ID 16768）编码。LAG-3是一种抑制性T细胞表面分子，调节T细胞活化和体内平衡。LAG-3在TCR参与后与CD8和CD4共定位并改变TCR信号传导。LAG-3在体内抑制淋巴细胞和一些树突状细胞群体的稳态增殖(HP)，并且在缺乏LAG-3的小鼠中观察到增强的HP。LAG-3信号传导显示负调节活化的T细胞中的STAT5磷酸化，并且在缺乏STAT5a和STAT5B的小鼠中LAG-3阻断后未观察到HP的增强。产生鼠LAG-3，具有一个信号肽序列（a.a.1-22），其去除产生具有大的细胞外区域的成熟蛋白（a.a.23-442），然后是跨膜片段（a.a.443-463）和胞质尾巴（a.a.464-521）。细胞外部分包含V型Ig样结构域（a.a.37-163），然后是三个C2型Ig样结构域（a.a.165-246、258-341和345-412）和在其C末端的2-氨基酸E-X序列的elven串联重复序列（a.a.493-518）。

计算分子量54.51/56.98 kDa（成熟/前体）。

表达鼠LAG-3的小鼠T细胞杂交瘤。

表位：在D3/D4域内。

流式细胞术分析：在体外通过CD3交联活化的野生型（而非Lag3-敲除）小鼠脾细胞的CD4+和CD8+群体中，来自一个代表性批次的2.5 µg/mL检测到表面LAG-3免疫反应性（由Dario a.Vignali，Ph.D.，University of Pittsburgh，PA，U.S.A.提供）。
流式细胞术分析：对代表性批次进行了荧光偶联，并在移植有鼠B16黑色素瘤、MC38结肠腺癌或Sa1N纤维肉瘤细胞的小鼠中形成的肿瘤中，检测到浸润淋巴细胞(TIL)的CD4+和CD8+群体中LAG-3阳性细胞数量增加（Woo，S.R.，et al.（2012）.Cancer Res. 72(4): 917–927）。
流式细胞术分析：预先与Alexa Fluor^™ 647偶联的一个代表性批次，通过对未透性化和透性化原代小鼠CD4+ T细胞进行免疫荧光染色，通过固定化抗体通过CD3 & CD28交联在体外活化，检测表面和细胞内LAG-3。在透化之前对细胞进行链霉蛋白酶处理消除了细胞表面染色（Woo，S.R.，et al.（2010）.Eur. J. Immunol. 40（6）:1768-1777）。
流式细胞术分析：预先与Alexa Fluor 647偶联的代表性批次在链霉蛋白酶处理的初始表面LAG-3降解后，检测到活化的鼠CD4+ T细胞上细胞表面LAG-3免疫反应性的时间依赖性恢复。蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺（目录号239764）或蛋白质转运抑制剂布雷菲德菌素A（目录号203729）处理部分阻断了恢复（Woo，S.R.，et al.（2010）.Eur. J. Immunol. 40（6）:1768-1777）。
免疫细胞化学分析：一个代表性批次通过荧光免疫细胞化学染色检测了未透性化和透性化原代小鼠CD4+ T细胞的表面和细胞内LAG-3，该细胞通过固定抗体通过CD3 & CD28交联在体外活化。在透化之前对细胞进行链霉蛋白酶处理消除了细胞表面染色（Woo，S.R.，et al.（2010）.Eur. J. Immunol. 40（6）:1768-1777）。
免疫细胞化学分析：一个代表性批次通过链霉蛋白酶处理和透化后活化的鼠CD4+ T细胞的荧光免疫细胞化学染色检测到与早期和再循环内体标志物EEA1以及内体标志物Rab11b和Rab27a共定位的细胞内LAG-3免疫反应性（Woo，S.R.，et al.（2010）.Eur. J. Immunol. 40（6）:1768-1777）。

经验证，该抗LAG3抗体（克隆4-10-C9）可用于流式细胞术和免疫细胞化学检测LAG3。

通过靶向第三和第四Ig样结构域（D3/D4结构域；第二和第三C2型Ig样结构域）内的细胞外表位，在活化的CD4+ T细胞上克隆4-10-C9免疫组化染色表面LAG-3。链霉蛋白酶处理引起的表面LAG-3降解消除了细胞表面染色（Woo，S.R.，et al.（2010）.Eur. J. Immunol. 40（6）:1768-1777）。

形式：纯化

通过流式细胞术在小鼠脾细胞中进行评价。

流式细胞术分析：1 µg/mL的该抗体在3天2 µg/mL的伴刀豆球蛋白A（Con A）刺激后在分离的小鼠脾细胞中检测到LAG-3阳性群体的诱导。

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