ApopTag 荧光素原位凋亡检测试剂盒利用与荧光素报告分子偶联的抗地高辛抗体，通过间接TUNEL法检测原位凋亡细胞。它为40个样品提供间接免疫荧光染色。使用流式细胞仪或荧光显微镜分析结果。

ApopTag 荧光素原位凋亡检测试剂盒已在这些模型系统中进行了特异性染色测试：（a）在细胞纺丝中染色的地塞米松诱导的人正常外周血淋巴细胞，（b）在福尔马林固定，石蜡包埋的切片中染色的大鼠乳腺退化，以及（c）喜树碱诱导的人白血病外周血淋巴细胞，染色在细胞悬液中并用于定量流式细胞仪。

ApopTag荧光素原位凋亡检测试剂盒利用与荧光素报告分子偶联的抗地高辛抗体，通过间接TUNEL法检测原位凋亡细胞。

说明

ApopTag 原位凋亡检测试剂盒通过利用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）修饰基因组DNA来标记研究样品中的凋亡细胞，从而通过特异性染色检测阳性细胞。本手册包含ApopTag 荧光素原位细胞凋亡检测试剂盒（目录编号S7110）的信息和方案。

程序原理

所有ApopTag 试剂盒中提供的试剂旨在用化学标记和未标记的核苷酸原位标记游离的3′OH DNA末端。反应缓冲液中包含的核苷酸通过末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）酶促添加到DNA中（13，31）。TdT催化不依赖模板的核苷酸三磷酸添加到双链或单链DNA的3′-OH末端。掺入的核苷酸以随机序列形成由地高辛核苷酸和未标记的核苷酸组成的寡聚物。优化ApopTag 试剂盒中标记核苷酸与未标记核苷酸的比例，以促进抗地高辛配基抗体的结合，或最大程度地减少荧光素的自猝灭。尚未测量添加的低聚物的确切长度。

然后允许用地高辛配基-核苷酸标记的DNA片段结合与荧光素偶联的抗地高辛配基抗体（图1A）。荧光抗体在免疫组织化学或免疫细胞化学中（即在组织或细胞上）提供灵敏的检测，并且由于底物或显影步骤而不受实验变化的影响。这种混合的分子生物学组织化学系统可以对位于凋亡小体中的非常高浓度的3′-OH末端进行敏感和特异性染色。ApopTag系统与先前描述的凋亡原位标记技术有很大不同（13、16、38，46），其中抗生物素蛋白与细胞生物素的结合可能是错误的来源。已发现地高辛/抗地高辛系统对抗生物素蛋白/生物素系统同样敏感（22）。用于结合抗地高辛抗体的免疫化学相似配体在动物组织中通常是微不足道的，从而确保了低背景染色。亲和纯化的绵羊多克隆抗体是ApopTag 试剂盒中使用的特异性抗地高辛试剂，并与主要脊椎动物类固醇表现出<1%的交叉反应性。此外，该抗体的Fc部分已通过蛋白水解消化去除，以消除对细胞Fc受体的任何非特异性吸附。

平衡缓冲液90416 3.0 mL-15°C至-25°C

反应缓冲液90417 2.0 mL -15°C至-25°C

TdT酶90418 0.64 mL -15°C至-25°C

终止/洗涤缓冲液90419 20 mL -15°C至-25°C

封闭液90425 2.6 mL -15°C至-25°C

抗地高辛-荧光素*90426 2.1 mL 2°C至8°C

塑料盖玻片90421 100 ea.蛋白

*亲和纯化的绵羊多克隆抗体

1.将试剂盒储存在-15°C至-25°C下，直至首次使用。 首次使用后，如果试剂盒将在三个月内使用，则将TdT酶（#90418）储存在-15°C至-25°C，其余组分储存在2°C至8°C。

2.保护抗地高辛荧光素抗体（#90426）避免不必要的光暴露。

注意事项

1.以下试剂盒组件包含二甲胂酸钾（二甲基胂酸）作为缓冲液：平衡缓冲液（#90416），反应缓冲液（#90417）和TdT酶（#90418）。如果吞食，这些成分是有害的；避免接触皮肤和眼睛（戴上手套，眼镜），并立即清洗接触区域。

2.抗体偶联物（90426）和封闭液（#90425），含有0.08%叠氮化钠作为防腐剂。

3.TdT酶（#90418）含有甘油，在-20°C时不会结冰。对于最长有效期，请勿将该试剂在分装前加热至室温。

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