Merck
CN

03143414001

Roche

Genopure质粒中提试剂盒

kit of for 20 isolations from 5 to 30 ml

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别名:
质粒隔离

质量水平

制造商/商品名称

Roche

包装

kit of for 20 isolations from 5 to 30 ml

一般描述

用50 μg纯化的质粒测试质粒回收率。回收率>90%且超螺旋形式超过80%。通过从DH5a细胞中分离pBS对质粒DNA的产量进行了测定。从30ml A600密度为在3和6之间的培养物中获得了>85 μg的质粒DNA。

(通过检测A260/A280比例得出)纯度为1.8 + 0.2。

没有检测到RNA。

已经根据目前的质量控制过程测试了试剂盒组分中没有核酸酶。

应用

Genopure质粒中抽试剂盒可从细菌培养液中制备中量级的转染级质粒DNA(最高100 μg质粒)。分离的质粒适用于绝大多数分子生物学应用:

  • 转染
  • Southern blotting
  • 测序
  • PCR
  • 限制性分析
  • 克隆

特点和优势

Genopure质粒中抽试剂盒使用了改良的碱性裂解法制备中等量的高纯度质粒DNA。

  • 使用即用型试剂,节省时间。
最多可纯化20个样品(10分钟手动操作/总共75分钟)。
  • 可纯化所有大小和类型的质粒,
甚至是BAC DNA,因为可以过滤粗裂解物以避免质粒剪切。
  • 可并行处理多个样本
使用高速重力流动柱。
  • 无需使用有害的有机化合物
如氯化铯、苯酚、氯仿和溴化乙锭。
  • 所得质粒DNA的纯度高于
通过2×氯化铯梯度离心制备的质粒。

组分

  • 悬浮缓冲液
  • RNase A
  • 裂解缓冲液
  • 中和缓冲液
  • 平衡缓冲液
  • 洗涤缓冲液
  • 洗脱缓冲液
  • NucleoBond AX 100色谱柱
  • 折叠式过滤器(直径150 mm)
  • 密封圈

质量

已对使用该试剂盒纯化得到的质粒DNA进行了限制性酶切消化测试;根据实验方案所述方法从转化HB101中分离得到pUC 19。如琼脂糖凝胶分析所示,在+ 37℃下使用1单位Msp I将1μg质粒完全酶解2小时。

用50μg纯化质粒测试质粒回收率。超螺旋形式大于80%时,回收率高于90%。通过从DH5a细胞中分离pBS,确定质粒DNA的产量。从A600密度为3-6的30 ml培养物中,获得超过85μg的质粒DNA。

纯度(利用A260/A280比率进行检测)为1.8±0.2。

利用通过标准方法纯化并通过琼脂糖凝胶电泳检测的3 μg pBS分析RNA污染。结果未检测到RNA。

已经根据当前的质量控制流程,检测发现试剂盒组分不含核酸酶。

制备说明

分离流程基于改良的碱性裂解法,可分为以下步骤:细菌被部分裂解,使质粒DNA透过细胞壁进入上清液。较大的大肠杆菌染色体DNA被困在细胞壁中。通过过滤或离心,除去裂解物中的细胞碎片,并将含有质粒DNA的组分上样到预平衡柱上。由于净化的裂解物溶于低盐缓冲液后再上样到柱上,使得质粒DNA与柱中的大孔阴离子交换材料结合。用高盐洗涤液从柱上洗脱细胞杂质。 最后,从柱上洗脱质粒DNA。将回收的DNA从洗脱液中沉淀出来,以除去盐并浓缩质粒。

分析说明

样品:
含有高拷贝数质粒的大肠杆菌培养物:5至30mL细菌培养物
含有低拷贝数质粒的大肠杆菌培养物:100至100mL细菌培养物
质粒大小:分离流程适用于所有大小的质粒。注意:较大构建体(高达100 kb)的裂解液应通过过滤而不是离心来净化,以避免剪切质粒。
所需时间:60分钟(包括过滤裂解液)
一般产量:
高拷贝数质粒:3至5 μg/mL培养物
低拷贝数质粒:0.2至1 μg/mL培养物
产物纯度:分离的质粒DNA不含其他细菌成分,包括RNA。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

象形图

FlameCorrosion

警示用语:

Danger

危险声明

危险分类

Eye Dam. 1 - Flam. Liq. 3 - Met. Corr. 1 - Skin Corr. 1

储存分类代码

3 - Flammable liquids

WGK

WGK 1

闪点(°F)

100.4 °F

闪点(°C)

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