高纯RNA石蜡试剂盒

从FFPE样本材料中分离低至中等通量的RNA。

高纯度RNA石蜡试剂盒从石蜡包埋的新鲜冷冻组织中分离总RNA。所获得的RNA的质量适合于用RT-PCR对mRNA进行相对定量，特别是在基于Lightcycler^® Carousel的系统上。其他应用包括：

• RT-PCR
• 差异显示RT-PCR
• cDNA合成
• 引物延伸

高纯度RNA石蜡试剂盒从福尔马林固定、石蜡包埋的组织以及新鲜冷冻组织研究样本中分离总RNA，直接用于RT-PCR。

• 从存档石蜡组织（最长15年）中分离适合RT-PCR的RNA。
• 获得即用型浓缩产物（无需RNA沉淀）。
• 在大约2小时内（过夜消化后）从组织切片中快速制备总RNA。
• 获得高纯度的RNA，用于相对mRNA定量程序（例如，使用Lightcycler^®系统）。
• 无需使用危险的有机化合物，如氯化铯、苯酚、氯仿和溴化乙锭。

在与蛋白酶K（石蜡样品）或使用合适的组织匀浆器（新鲜冷冻的组织）过夜孵育期间，将组织样品破碎并匀浆。核酸在离液盐的存在下特异性结合到预先包装在高纯度纯化过滤管（1）中的玻璃纤维表面。由于水分子的有组织结构的破坏以及与核酸的相互作用，结合反应在几秒钟内发生。结合过程通常对核酸具有特异性，但结合条件针对RNA进行了优化。在一系列短暂的洗涤和旋转步骤中纯化结合的RNA，以去除细胞成分。从柱上洗脱后，通过将洗脱液与DNase I孵育来消化残留的DNA。用蛋白酶K进行第二个孵育步骤可提高RNA的纯度。最后，低盐洗脱将RNA从玻璃纤维羊毛中释放出来。

在离液盐（盐酸胍）存在下，核酸可与玻璃羊毛状物的表面结合。这使得高纯过滤管能够特异性地固定核酸（DNA和RNA），同时不含污染物。对于RNA分离，结合条件可以优化，以确保所有RNA的固定化。

容量：高纯旋转过滤管最多可容纳800 μL的样品体积。

样品材料：

• 5-10 μm切片来自福尔马林固定，石蜡包埋的组织（例如，哺乳动物物种的结肠，乳房，肝脏，肾脏，脾脏，包括人类研究样品）。
• 20-30 mg新鲜冷冻的固体组织。
• 3 × 5 μm新鲜冷冻组织的组织切片。

将福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片通过过夜蛋白酶K消化进行匀浆，并按照描述进行纯化。核糖核酸产量是通过测量260纳米的光密度来确定的。RNA洗脱液用于一步式RT-PCR，并带有β2M基因的特异性引物。在以下LightCycler^® PCR中，使用LightCycler^® RNA扩增试剂盒SYBR Green I和β2M的特异性引物，在小于24的cp值下获得预期的扩增信号。通过无逆转录酶步骤的LightCycler ^® PCR检查是否存在污染性基因组DNA；未获得扩增产物。

仅用于生命科学研究。不用于诊断操作。

纯化的RNA不含DNA，核酸酶以及所有干扰RT-PCR的细胞和样品成分。通常，从福尔马林固定的组织中分离的RNA片段范围为150至1500个碱基。RNA的大部分长度为250个碱基。

LightCycler is a registered trademark of Roche