5-溴-2′-脱氧尿苷标记和检测试剂盒I

该试剂盒利用免疫荧光显微镜检测掺入细胞DNA中的BrdU。它通过 体外 标记细胞或器官培养物或者通过 体内 标记而检测DNA合成，其中必须在固定前制备冷冻或石蜡包埋的组织切片。
通常，只有通过DNA变性才能实现抗体的结合。通常，将细胞暴露于酸、碱或加热可使DNA变性。然而，这些步骤会破坏细胞完整性，包括细胞形态以及表面和细胞质标记物。
BrdU标记和检测试剂盒I能够避免这些问题的发生。抗体制剂含有特异性核酸酶，其在使用酸性乙醇固定后可以接近BrdU。因此，也可以同时检测其他标记物（双重染色）。

用乙醇固定以BrdU预标记的样本，然后使用BrdU单克隆抗体孵育。试剂盒提供的BrdU抗体含有优化的核酸酶混合物。这些核酸酶产生的单链DNA片段能够与BrdU抗体结合，同时不破坏细胞形态。加入荧光素标记的小鼠免疫球蛋白抗体，然后与BrdU抗体结合。随后，使用免疫荧光显微镜评价样本。

• 安全：未使用放射性同位素
• 易于使用：遵循标准免疫荧光方案
• 灵敏度：利用核酸酶使DNA变性，可实现高灵敏度的BrdU检测
• 灵活：适用于双重标记方法

BrdU标记和检测试剂盒用于检测掺入细胞DNA的5-溴-2′-脱氧尿苷（BrdU）。

BrdU单克隆抗体与5-溴-2′-脱氧尿苷发生特异性结合，并表现出与5-碘-2′-脱氧尿苷（10%）的交叉反应性。BrdU抗体与5-氟-2′-脱氧尿苷或任何内源细胞组分（如胸苷或尿苷）无交叉反应性。

1个试剂盒包含5个组分

通过监测掺入细胞DNA的放射性同位素[3H]-胸苷并进行放射自显影检测，可对细胞增殖进行研究。或者，可以使用5-溴-2′-脱氧尿苷（BrdU）代替胸苷。使用BrdU单克隆抗体以及酶或荧光染料偶联的二抗，能够轻松检测到DNA已掺入BrdU的细胞。
工作溶液：BrdU标记培养基
使用无菌细胞培养基按1：1000稀释BrdU标记试剂（终浓度10μM）。
注：对于体内标记，需要使用未稀释的BrdU标记试剂（1-2ml/100g体重）。
临用前配制。
BrdU抗体工作溶液
使用孵育缓冲液按1:10稀释BrdU抗体溶液。
临用前配制。
抗小鼠Ig抗体-荧光素储溶
将抗小鼠Ig抗体-荧光素溶液溶解于1 ml双蒸水中。
抗小鼠Ig抗体-荧光素工作溶液
用PBS按1:10稀释抗小鼠Ig抗体-荧光素储溶。如果需要长期储存，则加入BSA（牛血清白蛋白），10 mg/ml。
临用前配制。
洗涤缓冲液
使用双蒸水按1：10稀释洗涤缓冲液浓缩液（10x）（2号瓶）。
储存条件（工作溶液）：BrdU标记培养基
将未稀释（1000x）培养基分装并保存在-15至-25°C下。
BrdU抗体工作溶液
未稀释抗体保存在-15至-25°C下。
抗小鼠Ig抗体-荧光素储液
可在2至8°下稳定保存。
洗涤缓冲液
可在2至8°下稳定保存。
样本材料：细胞培养：贴壁细胞，悬浮细胞，器官或外植体培养物。组织切片（经BrdU 体内 标记后）。

仅用于生命科学研究。不用于诊断操作。