生物来源
bacterial (Thermus thermophilus)
质量水平
重组
expressed in E. coli
表单
liquid
用途
sufficient for ≤200 reactions
比活
5 U/μL
包装
pkg of 500 U (2 x 250_U)
制造商/商品名称
Roche
浓度
0.5-5.0 units (per reaction for PCR (standard))
2.5 units (per reaction for PCR (standard))
参数
75 °C optimum reaction temp.
技术
PCR: suitable
RT-PCR: suitable
nucleic acid labeling: suitable
颜色
colorless
最佳pH
~9.0 (25 °C)
溶解性
water: miscible
适用性
suitable for molecular biology
UniProt登记号
应用
life science and biopharma
异质活性
Endonuclease, none detected (up to 20 enzyme units using Lambda-DNA/ 16h/37°C)
Nicking activity, none detected ( up to 20 enzyme units using pBR322-DNA / 16h/37°C)
RNases, none detected (up to 20 enzyme units using MS II-RNA; 4h/37°C)
储存温度
−20°C
一般描述
Tth DNA聚合酶是从嗜热真细菌Thermus thermophilusHB8中分离出来，纯化后没有非特异性脱氧核糖核酸酶和核糖核酸酶。这种酶是一种进行性5′-3′DNA聚合酶，没有3′-5′核酸外切酶活性。该酶在大约pH9（+25℃调整），温度+75℃时活性最高。它在高温（95℃）延长反应中依然保持活性。
应用
嗜热菌（Thermus thermophilus）（Tth）DNA聚合酶能用于：
- 通过聚合酶链反应（PCR）扩增DNA片段，由于其在高温（95°C）长时间培育依然保持活性
- 放射性标记核苷酸、地高辛或生物素标记的DNA片段，由于其能将修饰的脱氧核糖核苷酸用作底物
- 有效地将靶标RNA转录为cDNA，由于其内在的Mn依赖性逆转录酶（RT）活性
- 用于实时PCR
生化/生理作用
嗜热菌（Thermus thermophilus）（Tth） DNA聚合酶是一种具有热稳定性的DNA聚合酶，有逆向转录酶活性。此酶是高度进行性的5′-3′DNA聚合酶，缺乏3′-5′核酸外切酶活性（校对）。 内在的逆向转录酶（RT）活性在镁离子存在的条件下，转录效率高远高于大肠杆菌DNA聚合酶I和Taq DNA聚合酶的转录效率。RT 活性和核酸酶H活性无关。Tth DNA聚合酶在较高的温度范围（最佳范围+55℃到+70℃，最高温度+95℃）依然有活性，克服了RNA二级结构问题。生成的cDNA在Mg2+存在的情况下，可通过相同的酶进行PCR扩增。Tth DNA聚合酶能够在较高的温度范围进行逆向转录和DNA扩增，因此可用于对细胞和病毒RNA进行定量RT-PCR、克隆和基因表达分析。Tth DNA聚合酶可用于最多1kbRNA RT-PCR扩增。
特点和优势
Tth DNA聚合酶：
- 确保优化聚合酶链反应（PCR）得到的产品大小在RT-PCR反应中至少达到1,000 bp
- 可将修饰的脱氧核糖核苷三磷酸用作底物
- 与核酸酶 H活性无关
- 具有高温热稳定性可以克服该问题，高温热稳定性通常与RNA中存在的高级二级结构有关
包装
1个试剂盒包含3个组分
质量
每一批次的Tth DNA聚合酶均在活化的DNA上进行了活性分析。我们使用λDNA和人类基因组DNA进行功能测试。使用小鼠全RNA和β-actin的特异性引物开展RT/PCR分析。针对每一批次的Tth DNA聚合酶，我们均按照当前质控流程进行检验，确保其中不存在外切核酸酶和内切核酸酶活性，以及具有切割活性的污染物。依照当前的质控流程，我们还采用了一套独特的自启动检测来确保产品中不存在DNA污染。
单位定义
一单位Tth DNA聚合酶的定义为，在+70 °C下，在30分钟时间内将10 nmol总dNTP催化整合为酸性可沉淀DNA所需的酶量，这一检测条件在“单位检测”中有具体说明。
单位检测：孵育缓冲液，用于分析活化的DNA
67 mM Tris-HCI, pH 8.8 (+25 °C)， 16.6 mM (NH4)2SO4，6.7 mM MgCl2，10 mM 2-巯基乙酸，dATP，dCTP，dGTP，dTTP 每种0.2mM。
孵育步骤
在+70 °C下，将12.5 μg 激活的鲱鱼精子DNA和0.1 μ Ci [α32P] dCTP与0.01至0.1 个单位的Tth DNA聚合酶在50 μl孵育缓冲液中共同孵育（有石蜡油保护）30分钟。
随后通过三氟乙酸沉淀法和闪烁计数来确定整合的dNTP量。
体积活性：单一PCR（经优化）反应需0.5至5 U
单次PCR（标准）反应需2.5 U
激活DNA分析的测定结果在“单位检测”部分中进行描述。
单位检测：孵育缓冲液，用于分析活化的DNA
67 mM Tris-HCI, pH 8.8 (+25 °C)， 16.6 mM (NH4)2SO4，6.7 mM MgCl2，10 mM 2-巯基乙酸，dATP，dCTP，dGTP，dTTP 每种0.2mM。
孵育步骤
在+70 °C下，将12.5 μg 激活的鲱鱼精子DNA和0.1 μ Ci [α32P] dCTP与0.01至0.1 个单位的Tth DNA聚合酶在50 μl孵育缓冲液中共同孵育（有石蜡油保护）30分钟。
随后通过三氟乙酸沉淀法和闪烁计数来确定整合的dNTP量。
体积活性：单一PCR（经优化）反应需0.5至5 U
单次PCR（标准）反应需2.5 U
激活DNA分析的测定结果在“单位检测”部分中进行描述。
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
法律信息
本产品的使用受到美国专利及其对应的境外专利声明保护。购买本产品，即相当于依照境外的专利声明获得了一份受限制、不可转让的使用许可，即将此等数量的产品仅用于购买者′内部的研究用途。不享受任何其他专利权利。无权进行任何商业活动，包括无批准报告购买者使用结果，免费使用等。不能给出任何商业暗示。禁止反言。本产品仅适合于研究用途。如需用于Roche专利许可的诊断用途，需要获得一份独立的Roche许可。有关购买许可的更多信息，可联系Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA获取。
仅试剂盒组分
产品编号
说明
- PCR Buffer, including MgCl2 10x concentrated
- RT-PCR Buffer, coupled reaction in one tube 5x concentrated
- Mn(OAc)2-Solution 25 mM
储存分类代码
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 1
闪点(°F)
does not flash
闪点(°C)
does not flash
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