原位细胞死亡检测试剂盒，AP

在免疫组织化学研究中，可通过光学显微镜利用该试剂盒检测和定量单细胞水平的凋亡细胞。

内容物：

• 酶溶液(TdT)
• 标记溶液（荧光素-dUTP）
• 转换AP（抗荧光抗体-AP），即用型

TUNEL反应倾向于对在凋亡过程中产生的DNA链断裂进行标记。这能够将凋亡与坏死以及由细胞增殖抑制药物或放射诱导的初级DNA链断裂进行区分。

原位细胞死亡检测试剂盒AP，是一种准确，快速，简单的非放射性技术，通过光学显微镜检测和定量单细胞水平和组织中凋亡性细胞死亡；它不可用于诊断。因此，原位细胞死亡检测试剂盒可用于许多不同的检测体系。比如：

• 在基础研究中，检测冷冻和福尔马林固定组织切片中的单个凋亡细胞†
• 在癌症研究中，检测恶性肿瘤细胞对于药物引起的细胞凋亡的敏感度
• 通过复染法对经过异质性群体死亡的细胞进行分型

1个试剂盒包含3种组分。

广泛使用的方法用于确定凋亡，包括基于琼脂糖凝胶电泳的基因组DNA分析以及基于³H-胸苷或5-溴-2′-脱氧-尿苷的DNA片段检测。方法包括在一个特定细胞群体中，将片段化的低分子量DNA和片段化的高分子量DNA分开。因此，这些方法无法给出特定细胞群体，尤其是组织切片中某一个细胞的情况。或者，单个凋亡细胞可以在显微镜下确认，因为会出现细胞核染色体浓缩和碎片化的特征。但是这种方法比较主观，而且当形态变化发生很快时，能够观察到的窗口期很短
凋亡的标志性事件就是DNA降解，在早期阶段，该事件的发生在核小体间DNA连接区域是有选择性的。DNA的切割可能会产生双链和单链的DNA断裂（切口）。两种类型的断裂都可在酶促反应中利用修饰的核苷酸（如生物素-dUTP、DIG-dUTP、荧光素-dUTP）的游离3′-OH端标记而被检测到。这些酶末端转脱氧核苷酰酶（TdT）可催化脱氧核糖核苷酸的模板非依赖性聚合至单链及双链DNA的 3′-末端。这种方法也被称之为TUNEL(TdT-介导的 dUTP-X缺口 末端标记)。或者，游离的3′-OH基团可能通过一种称为切口翻译的模板依赖机制而利用DNA聚合酶被标记。不过，TUNEL方法被认为灵敏度更高，更迅速。

样本材料：细胞肽和细胞涂片制备，生长在载玻片上的附着细胞，冷冻或石蜡包埋的组织切片。

原位细胞死亡检测试剂盒AP能够检测凋亡早期阶段单链和双链DNA断裂。
凋亡细胞被固定和透化。随后，细胞和含有TdT和荧光素-DUTP的TUNEL反应混合物共同培养。在培养阶段，TdT催化单链和双链DNA加入荧光素-DUTP自由3′-OH基团。洗涤后，标记插入DNA损伤位置，标记是抗荧光素抗体偶联报告酶碱性磷酸酶。冲洗掉去除没有连接上的酶偶联物后，免疫复合体中留存的AP通过底物反应显现。

工作溶液：将全部体积（50 μl）的酶溶液加入至剩下的450 μl标记溶液以获得500 μl TUNEL反应混合物。
充分混合以平衡组分。
储备条件 (工作溶液)：TUNEL反应混合物
TUNEL反应混合物需要在使用前立即使用，不能保存。使用前将TUNEL反应混合物放在冰上。

转换-AP
一旦转换-AP溶液融解，储存在2到8℃（最多稳定
6个月）。
注意：不可冷冻。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。