过氧化物酶标记试剂盒

过氧化物酶标记试剂盒负责用辣根的活化过氧化物酶 (POD) 标记生物分子的伯氨基。

纯度编号：(A405 nm/A275 nm)：3.0-3.5。
同工酶分布：> 90% 均相同工酶 C。
检测时间：开发的方法的反应温度为 + 25°C。在 + 25°C 下，反应时间应为 2 小时，但可以延长至 3 小时而不影响结果。或者，可在 + 2 至 + 8°C 下进行反应，反应时间为 18 小时至 24 小时。

过氧化物酶标记试剂盒设计用于用过氧化物酶标记含有反应性和易接近的伯氨基（如多肽或蛋白质）的水溶性生物分子，用于分析方法。它特别适用于抗体与过氧化物酶的偶联 [1]，因为所得偶联物适用于免疫化学检测系统，如：

• ELISA（酶联免疫吸附试验）[2]
• 免疫组化
• 免疫印迹法 [3]

1 个试剂盒包含 7 种组分。

• 过氧化物酶（活化）
• 碳酸钠/碳酸氢盐缓冲液
• 硼氢化钠（片剂）
• 三乙醇胺缓冲液
• 甘氨酸溶液
• 透析缓冲液
• 稳定剂（包括 BSA 和 Kathon CG）

工作液： 工作液的制备

为获得最佳结果，用适当编号标记各溶液。标示体积足以标记部分 1.2 mg IgG。

溶液 1：过氧化物酶（活化）
在 0.5 mL 双蒸水中复溶瓶 1 的冻干品（过氧化物酶浓度 = 16 mg/mL）。

溶液 2：碳酸钠/碳酸氢钠缓冲液 (100 mM，pH 9.8)
将瓶 2 平衡至 15-25°C。确保所有缓冲液组分均溶解。向 90 mL 双蒸水中加入 10 mL 瓶 2，混匀。

溶液 3：硼氢化钠溶液 (200 mM)
我们建议在处理硼氢化钠时佩戴手套。临用前制备溶液，并置于冰上冷却。向 130 mL 冷双蒸水中加入 1 片瓶 3，混匀。

溶液 4：三乙醇胺缓冲液 (2 M，pH 8.0)
瓶 4，即用型。将瓶平衡至 15-25°C。确保所有缓冲液组分均溶解。

溶液 5：甘氨酸溶液 (1 M，pH 7.0)
将瓶 5 的冻干液复溶于 0.5 mL 双联管。水（甘氨酸浓度 = 1 M）

溶液 6：透析缓冲液（1x 浓度）
将瓶 6 平衡至 15-25°C。确保所有缓冲液组分均溶解。将 30 mL 瓶 6 加入 570 mL 双联滴定管中。水，混匀。

溶液 7：稳定剂
瓶 7 即用型。将瓶平衡至 15 ~ 25°C。

免疫球蛋白溶液的制备
抗体溶液的 IgG 浓度应约为 4 mg/mL（3.8 至 4.2 mg/mL）。该浓度对耦合至关重要，因此应在每次耦合前进行光度测定检查，必要时进行调整：1 mg/mL = 1.40（A _{280 nm} 和 1 cm 光程）。每次标记反应需要 0.3 mL 该溶液。
注意： 不要使用防腐剂，如叠氮化钠和稳定剂，如白蛋白或洗涤剂。

无盐冻干免疫球蛋白
称取 1.6 mg，转入适宜容器中，溶于 0.4 mL 溶液 2 中。检查浓度和 pH 值，必要时进行调节。

当免疫球蛋白溶于不含额外蛋白质或防腐剂的磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 时，缓冲液

• 中的免疫球蛋白：用 1 M 碳酸钠缓冲液（瓶 2）将 pH 值调节至 9.8。如有必要，用溶液 2 稀释，使 IgG 浓度为 4 mg/mL。
• 当免疫球蛋白溶解在含有有机盐的缓冲液中时：用溶液 2 透析免疫球蛋白，并用溶液 2 调整浓度至 4 mg/mL。

IgG 溶液的稳定性
这些溶液应始终立即制备备用。
储存条件（工作液）： 溶液的稳定性

• 溶液 1 在 2 ~ 8°C 条件下可稳定储存 3 个月。该溶液可等分并在-60°C 或更低温度下震荡冷冻，然后在-15~-25°C 条件下储存；请注意，可观察到 10-20% 的失真。
• 溶液 2、5 和 6 在 2°C 至 8°C 条件下可稳定 1 周，在-15°C 至-25°C 条件下冷冻储存时可稳定 6 个月。
• 溶液 3 应始终在临用前制备。
• 溶液 4 和 7 在 2°C 至 8°C 下可保持稳定，直至试剂盒上注明的失效日期。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。