细胞凋亡 DNA试剂盒

细胞凋亡 DNA试剂盒可快速分离DNA，可通过凝胶电泳分析和表征，以确定凋亡细胞死亡。

在试剂盒规定的条件下，只有核酸会与玻璃纤维过滤器结合。盐、蛋白质和其他细胞成分不结合。

血液或细胞裂解是通过用特殊的结合/裂解缓冲液孵育样品来完成的。样品通过含有玻璃纤维起绒的柱离心。在结合/裂解缓冲液中，核酸快速并优先结合在玻璃纤维表面。洗涤缓冲液可以冲洗掉盐、蛋白质和其他细胞碎片。然后用洗脱缓冲液通过离心步骤收集DNA。

该试剂盒提供了一种分离凋亡DNA片段进行DNA阶梯分析的方法。所用的纯化方法比其他DNA纯化方法(如苯酚/氯仿提取、DNA沉淀)快得多。纯化的DNA可以直接与凝胶加载缓冲液混合，并在琼脂糖凝胶上进行分析。

对细胞死亡的研究包括将死亡定性为凋亡或坏死。细胞凋亡的特征有：

• DNA 的溶解前、非随机断裂（琼脂糖凝胶电泳后的“梯状”模式）1
• 膜结合囊泡（或“凋亡小体”）的形成
• 由于细胞质浓缩导致的细胞皱缩

同样，坏死（或生理性细胞死亡）的特征为

• DNA 随机消化（琼脂糖凝胶电泳后 DNA 涂片）
• 肿胀的细胞器和细胞，由膜完整性丧失和细胞裂解导致
• 裂解后 DNA 片段化

正如这些差异所表明的，细胞死亡的分类可以通过观察细胞形态来完成，或者客观一点说，可通过分析基因组 DNA 来完成。解析凝胶上的 DNA 提供了一种快速且可记录的数据形式，用于区分细胞凋亡和坏死。

购买者须知：本产品专利许可权归Qiagen所有。

仅用于生命科学研究。不用于诊断操作。

1个试剂盒包含6个组分。

工作溶液：注意：在开始纯化反应之前，将洗脱缓冲液加热到70°C，所有其他试剂应在15 - 25°C。

工作液的配制

• 在洗涤缓冲液中加入80 ml分析级乙醇
• 将阳性对照品(紫色盖子)溶解在400 μl结合/裂解缓冲液中，立即混合。
• 在15 - 25°C孵育10分钟。

DNA凝胶电泳工作溶液的制备

EDTA溶液(0.5 M)
将18.6 g EDTA溶于80 ml双馏水中并搅拌。用1M NaOH调节pH 8.0 ± 0.1。EDTA在碱性pH下溶解。溶解后，加入双蒸馏水，最多可达100 ml。

TBE-Buffer
将5.4 g Tris, 2.8 g硼酸溶于800 ml双蒸馏水中，加入2 ml
的0.5 M EDTA溶液。搅拌至溶解，最终pH 8.0 ± 0.1。加入双蒸馏水，最多可达1升。

溴化乙锭原液
将50mg溴化乙锭溶于5ml双蒸馏水中（溴化乙锭是一种诱变剂和潜在的致癌物；在处理溴化乙锭溶液时，应戴手套并小心处理）。
另外，SYBR绿I核酸凝胶染色剂可以代替溴化乙锭。

加入缓冲液(10x)
将0.1 g十二烷基硫酸钠、25 mg溴酚蓝溶于7 ml双蒸馏水中，加入3 ml甘油
储存条件（工作溶液）：阳性对照品制备后可使用14天，分离对照DNA储存在-15至-25℃下。