usage
sufficient for 500 reactions, 25 μL sufficient for 500 reactions
shelf life
≤18 mo.
feature
dNTPs included, hotstart: no
manufacturer/tradename
Roche
concentration
2 ×
technique(s)
PCR: suitable, genotyping: suitable
input
crude DNA
storage temp.
−20°C
General description
KAPA2G 快速基因分型混合物（2X）是一种即用型主混合物，包括除引物和模板之外快速聚合酶链式反应所需的其他所有成分。ReadyMix™混合物还包含两种惰性染料，可以实现通过琼脂糖凝胶电泳分析PCR反应产物，而无需添加DNA上样溶液。KAPA Express Extract 系统包含一种设计用于快速样品降解的热稳定蛋白酶。KAPA Express Extract（一种新型热稳定蛋白酶和缓冲系统）能够在短短15分钟内从小鼠组织中提取出可立即用于PCR的DNA，带染料的 KAPA2G快速基因分型混合物含有的DNA聚合酶通过定向进化技术改造而具有高持续性和超高速。KAPA Express Extract和KAPA2G快速基因分型混合物的组合可在低至1小时内从小鼠组织中可靠地提取和扩增DNA片段，而传统方案则需要超过1天的时间。
Application
KAPA2G 快速基因分型混合物：
- 已被用于从小鼠尾巴、耳朵和脚趾组织中提取和扩增DNA
- 已被用于从其他动物组织和杂交瘤中提取和扩增DNA
- 适用于聚合酶链式反应（PCR）
Biochem/physiol Actions
以KAPA Express Extract提取的DNA使用KAPA2G 快速基因分型混合物和染料进行扩增。KAPA2G 快速基因分型混合物产生的DNA片段进行dA-tailed处理，并可克隆进TA克隆载体，或用于常规下游分析或应用，包括限制酶消化、克隆和测序。和野生型Taq一样，KAPA2G Fast 具有 5'→3'聚合酶和 5'→3'核酸外切酶活性，但是没有3'→5'核酸外切酶（校正）活性。KAPA2G Fast 具有类似于野生型 Taq的保真度；它的错误率为大约每结合1.7 x 105个核苷酸出现1次错误。裂解在热循环仪、加热器或水浴中进行，然后将样品离心，以回收含DNA的上清液。然后将上清液稀释10倍，再将其用作PCR模板。和依赖蛋白酶K消化的现有方案不同，采用KAPA Express Extract试剂盒可以在单个试管中方便地进行萃取，无需使用危险的化学物质或多个洗涤步骤。这一点显著降低了样本丢失或污染的风险。该过程可以产生充足的模板用于多种测定，并且易于放大，用于处理 96 孔板中的样品。每次萃取都能得到充足的模板，可用于至少100次基因分型PCR反应。萃取物（稀释的或未稀释的）在-15至-25°C下可稳定保存至少6个月。
Features and Benefits
提高生产能力、周转时间和可靠性：
优于粗提取方法和商业试剂盒：
快速注释：
- PCR-ready DNA 只需 15 分钟即可生成
- 最低限度的处理，从而降低样本丢失或污染的风险
- 有充足模板用于多种测定；易于缩放，以处理 96 孔格式的样本
- 快速可靠地扩增各种扩增子长度和 GC 含量各异的 DNA 片段
优于粗提取方法和商业试剂盒：
- 周转时间增加
- 特异性增加
- 成本降低
快速注释：
- 可以在短短 15 分钟内从小鼠尾巴、耳朵或脚趾组织中提取 PCR-ready DNA。PCR 前在 10 mM Tris-HCl (pH 8.0-8.5) 中稀释 DNA 提取物 10 倍，用 1 μL DNA/25 μL 反应。
- 提取液在 -20℃ 下可稳定储存 >6 个月。
- KAPA2G 快速(热启动) 基因分型混合物包含用于快速 PCR 的工程化 KAPA2G 快速 DNA 聚合酶，以及缓冲液、MgCl2 (1.5 mM，1X) 和 dNTP (每种 0.2 mM，1X)。
- KAPA2G 快速基因分型混合物中包含电泳上样染料，可将 PCR 产物直接上样到琼脂糖凝胶上进行分析。
- 对于 <1 kb 的扩增子，使用 15 s 退火时间，15 s 延伸时间，对于更长的扩增子，使用 15-30 s/kb 延伸时间。
Preparation Note
在每次使用前，应确保产品已完全解冻并充分混合。短期使用时，可将试剂保存 4°C 条件下（最长 1 个月）。长期储存时，应将试剂放回 -20°C 环境中。如果所有成分都经过小心处理且未被污染，试剂盒在室温下放置短时间（最长 3 天）预计不会受到损害。
Analysis Note
KAPA 小鼠基因分型试剂盒包含的所有组分都经过严格的质量控制测试，无污染的核酸外切酶和核酸内切酶活性，并且符合严格的 DNA 污染要求。
Other Notes
仅供研究使用。不可用于诊断过程。
Legal Information
ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC
仅试剂盒组分
产品编号
说明
- KAPA2G Fast DNA Polymerase
- KAPA2G Buffer A
- dNTPs 0.2 mM each at 1X
- MgCl2 1.5 mM at 1X
- stabilizers
- dye
signalword
Warning
hcodes
Hazard Classifications
STOT SE 2
存储类别
12 - Non Combustible Liquids
wgk
WGK 1
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