Kpn I

相容末端
Kpn I 末端与任何其他已知限制酶产生的末端不相容。

同裂酶
Kpn I 是 Asp 718 I 的同切点酶（生成具有 5′ 粘性末端的片段）。

甲基化敏感性
在识别序列中的一个或两个 C 残基上，Kpn I 均不受 5-甲基胞嘧啶的抑制，也不被 6-甲基腺嘌呤抑制。

连接和重切割测定
将通过完全消化 1 μg λ × EcoR I 片段获得的 Kpn I 片段与 10 μl 的 1U T4 DNA 连接酶连接，连接方法是在 66 mM Tris-HCl 溶液（含 5 mM MgCl₂、5 mM 二硫苏糖醇、1 mM ATP，在+20°C下pH 7.5）中在 +4℃ 下孵育 16 小时，得到 1 μg λDNA × EcoR I 片段回收率高于 95%。
随后用 Kpn I 重新酶切，得到 >95% 的典型 λDNA × EcoR I × Kpn I 片段。

不同DNA的切割位点数量

• λ：2
• φX174: 0
• Ad2: 8
• M13mp7:0
• M13mp18:1
• pBR322：0
• pBR328：0
• pUC18:1
• SV40: 1

通过逐渐增加向培养混合物中添加的疏水试剂和甘油的量，可以改变 Kpn 的识别特异性。
识别位点：GGTACC
GGTACC
限制性酶切位点：GGTAC↓C
GGTAC↓C
热灭活：通过在 65℃ 温育 15 分钟（最多 3 U/μg DNA），可将 Kpn I 热灭活。
星号活性：Kpn I 在非最佳条件下可能表现出星号活性。

SuRE/Cut 缓冲液 L 需要添加 BSA（终浓度 100 μg/ml）。

SuRE/Cut 缓冲系统
推荐使用粗体缓冲液以获得最佳活力

• A：75-100%
• B：10-25%
• H：0-10%
• L：100%*
• M：25-50％

*随附的 SuRE/Cut 缓冲液 L 需要 添加 BSA（终浓度 100 μg/ml）。

缺乏非特异性内切核酸酶活性
将 1μg λDNA 与过量的 Kpn I 一起在 50 μl SuRE/Cut 缓冲液 L 中孵育 16 小时。分析证书提供了不改变酶特异性模式的酶单位数量。

缺乏核酸外切酶活性
将大约5 μg [³H]标记的小牛胸腺DNA与3 μl Kpn I 一起溶于总体积为100 μl的50mM Tris-HCl溶液（含10 mM MgCl₂、1mM二硫赤藓糖醇，pH约7.5）中 并在+ 37℃下孵育4小时。根据分析证书所述，在这些条件下，检测不到放射性释放。

在 PCR 缓冲液中的活性：50%

相对活性 在 PCR 混合液（Taq DNA 聚合酶缓冲液）中的相对活性为50%。PCR 混合物含有靶 DNA、引物、10 mM Tris-HCl（pH 8.3，20°C）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl₂、200μM dNTPs,2.5 UTaq DNA 聚合酶。混合物将进行 25 次扩增循环。Pwo SuperYield DNA聚合酶 PCR 混合物反应缓冲液中的活性为 100%。当添加富含 GC 的溶液：活性保持在 100%。Pwo SuperYield DNA 聚合酶 PCR 混合物不在美国销售。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

在总体积为 25 μl（1x）的（1x）SuRE/Cut 缓冲液 L（含 100 μg/ml BSA）中，一个单位是指在 +37 °C 下，一小时内完全切割 μg λDNA 所需的酶量。