Liberase^™ DH Research Grade

组织解离和细胞收集等脱细胞程序的最常用方法是基于蛋白水解酶的使用。蛋白酶可破坏组织的细胞外基质，从而实现单个细胞的释放或培养细胞的收集，以便转移细胞。细胞分离的目标是最大限度提高具有活力和功能活性的解离细胞的产量。
Liberase酶技术包含将梭菌胶原酶亚型纯化至高比活性的方法，以及将它们与高特异活性中性蛋白酶以最佳比例混合的方法，从而能够有效解离原代组织和培养细胞。Liberase DH Research Grade包含高度纯化的胶原酶I和胶原酶II。这两种胶原酶亚型以精确比例混合，并与高浓度Dispase混合^®，Dispase是一种非梭菌中性蛋白酶。
Liberase酶专用于提高组织解离的质量和可重复性，并改善分离细胞的生存能力和功能。Liberase纯化酶混合物取代了传统的胶原酶，后者是溶组织梭菌（Clostridium histolyticum）的粗制、可变的发酵副产物。

Liberase^™ DH（Dispase High）Research Grade被用于各种组织的解离，其中，高纯度的酶混合物是高细胞产量和活力所必需的。内毒素等细菌副产物可减少数千倍。
它已可用于消化转移性肿瘤碎片。它已可用于人胚胎干细胞集落的酶促解离。

• 采用含有较少梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性以及较低内毒素含量的酶混合物，最大限度提高分离细胞的活力和产量

。

• 由于胶原酶I + II的纯度较高（经过HPLC分析测定），

从而提高了酶混合物的比活性。

• 由于批次间的一致性较高，

从而提高了实验的可重复性。

稳定剂：钙
工作浓度：Liberase研究级酶工作浓度

Liberase酶的比活性显著高于传统胶原酶。这表示Liberase研究级纯化酶的工作浓度（以mg/ml表示）将低于传统胶原酶的工作浓度。

对于www.collagenase.com网站上Roche应用列表中的应用，请使用其建议的Liberase Research Grade浓度。

对于该列表未包括的应用，首次使用的Liberase TM Research Grade浓度为0.08–0.28 Wünsch单位/ml。

目标是确定Liberase研究级酶混合物的最佳起始浓度。这是一个起始浓度，最终浓度可能会因具体程序以及传统胶原酶的批次间差异而有所不同。

胶原酶工作浓度

将之前的胶原酶工作浓度（mg/ml）乘以其比活度（Wünsch单位/mg，[如上述测定所得]），得到Wünsch单位/ml。为确定Liberase研究级酶混合物的用量，首先用胶原酶工作浓度（以Wünsch单位/ml表示）乘以工作酶溶液的总体积，获得所需的总胶原酶活性（Wünsch单位）。除以Liberase Research Grade储液浓度所需的总胶原酶活性（“重悬和储存”？）。这代表工作酶溶液中所用的Liberase研究级酶混合物储液的体积(ml)。


储存条件（工作溶液）：将未使用的储液以单次用量进行分装，并保存在-15至-25°C。有关产品稳定性的更多信息，请访问Roche Liberase酶的网站：www.collagenase.com。

注意：避免反复冻融！

用注射级无菌水或组织解离缓冲液重悬冻干酶。不要在解离缓冲液中添加血清或其他成分（如白蛋白或蛋白酶抑制剂）。在较高浓度和较高温度（4°C）下，酶的稳定性会降低。应避免上述两种条件。

重悬全部内容物。不要称量冻干品的独立分装品。水分进入包装小瓶，将导致酶活性下降。

将冻干酶再水化时，应将小瓶置于冰上。

在2至8℃下轻轻摇动小瓶，直至酶完全溶解（最多30分钟）。

在某些用于溶解Liberase研究级纯化酶混合物的组织解离缓冲液类型中，可能会出现少量沉淀，这些沉淀易于溶解在稀释的工作液中，并且不影响酶活性。

取出一份储液的分装品，制备工作溶液。

重悬体积

2 ml（1小瓶，5 mg–10 mg包装规格）
10 ml（1小瓶，50 mg–100 mg包装规格）

胶原酶Wünsch（单位/ml）

13（1小瓶，5 mg–10 mg包装规格）
26（1小瓶，50 mg–100 mg包装规格）

总胶原酶浓度[mg/ml]

2.5（1小瓶，5 mg–10 mg包装规格）
5.0（1小瓶，50 mg–100 mg包装规格）

干燥储存

• 本品仅供生命科学研究和体外使用。这些产品不可用于诊断或临床应用，如人胰岛移植。
• 所有第一代Liberase和Liberase Blendzyme产品（Liberase HI、CI、RI、PI，Liberase Blendzyme 1、2、3、4）已被第二代Liberase Research Grade 和Liberase GMP级酶混合物产品系列取代。有关从第一代Liberase酶过渡至第二代产品的说明

仅限生命科学研究使用。不用于诊断操作。

Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.

Liberase is a trademark of Roche