表单
lyophilized (clear, colorless solution after reconstitution)
用途
sufficient for 250 tests (12140349001)
sufficient for 50 tests (12140322001)
制造商/商品名称
Roche
运输
wet ice
储存温度
2-8°C
一般描述
小鼠单克隆抗体(克隆 M30,小鼠 IgG 2b )用于检测上皮细胞凋亡(细胞角蛋白 18 的半胱天冬酶裂解产物)。以冻干、稳定、福尔马林级形式提供。
在细胞凋亡过程中,重要的细胞内蛋白被裂解。介导这一过程的蛋白酶称为半胱天冬酶(半胱氨酰-天冬氨酸蛋白酶)。半胱天冬酶以酶原的形式表达,由不同的细胞凋亡诱导剂激活。一旦激活,单个半胱天冬酶激活半胱天冬酶级联反应。直到最近才发现,细胞角蛋白,特别是细胞角蛋白 18 (CK18) 会受到早期细胞凋亡事件的影响。近期有研究表明,M30 抗体可识别细胞角蛋白 18 内的特异性半胱天冬酶裂解站点,这在正常细胞的天然 CK18 中无法检测到。因此,M30 细胞死亡抗体是在单细胞和组织切片中易于可靠测定极早期凋亡事件的独特工具。
在细胞凋亡过程中,重要的细胞内蛋白被裂解。介导这一过程的蛋白酶称为半胱天冬酶(半胱氨酰-天冬氨酸蛋白酶)。半胱天冬酶以酶原的形式表达,由不同的细胞凋亡诱导剂激活。一旦激活,单个半胱天冬酶激活半胱天冬酶级联反应。直到最近才发现,细胞角蛋白,特别是细胞角蛋白 18 (CK18) 会受到早期细胞凋亡事件的影响。近期有研究表明,M30 抗体可识别细胞角蛋白 18 内的特异性半胱天冬酶裂解站点,这在正常细胞的天然 CK18 中无法检测到。因此,M30 细胞死亡抗体是在单细胞和组织切片中易于可靠测定极早期凋亡事件的独特工具。
- 检测时间:细胞免疫荧光 2 小时,组织染色 3.5 小时(不包括脱蜡)
- 样品材料:贴壁细胞、组织样品(常规固定和石蜡包埋组织切片、冰冻切片)
特异性
M30 细胞死亡抗体与细胞角蛋白 18 (CK 18) 细胞骨架蛋白的半胱天冬酶裂解、福尔马林抗性表位结合。抗体的免疫反应性局限于凋亡细胞的胞浆。
应用
M30 细胞死亡抗体用于通过检测半胱天冬酶裂解后呈现的细胞角蛋白 18 的特异性表位来确定细胞和组织切片中的早期凋亡事件。通过将 M30 抗体应用于固定样本,然后使用适用于免疫组织化学、免疫细胞化学和流式细胞术的二级检测系统来检测细胞凋亡。
特点和优势
- 方便:易于使用的标准方案
- 明确结果:凋亡细胞与正常细胞最容易区分
- 细胞凋亡的早期检测:检测半胱天冬酶剪切的细胞角蛋白 18;半胱天冬酶活性是最早的细胞凋亡标志物之一
- 对石蜡包埋组织有用:对常规固定的组织样本有用;可进行逆行研究
外形
白色冻干物。在存在蛋白质稳定剂的情况下冻干抗体。
制备说明
工作浓度: 贮备液的浓度为 6.6 ng/μl。对于本品的 QC 释放试验,使用包装说明书中所述的细胞模型(TNF-α/放线菌素 D 处理的 HeLa 细胞)进行功能试验。蛋白质的量仅为储备产品 QC 放行检测的一部分,因此未将其纳入文件中。
工作液: 细胞免疫荧光和流式细胞术的程序
当使用其他检测方法或样品材料时,条件可能会发生变化,必须适应。
应用时,用孵育缓冲液 (M30 CytoDEATH) 稀释抗体储备液。
注: 抗体溶液应无沉淀。如有必要,使用前高速离心溶液。
免疫荧光和流式细胞术程序所需的附加工作液:
清洗缓冲液: 含 0.1% 吐温 20 的 PBS
孵育缓冲液: 含 BSA 和 0.1% 吐温 20 的 PBS
免疫组化程序
当使用其他检测方法或样品材料时,条件可能会发生变化,必须进行调整。
用孵育缓冲液稀释抗体储备液。
注: 抗体溶液应无沉淀。如有必要,使用前高速离心溶液。
工作溶液需要执行免疫组织化学染色程序:
清洗缓冲液: 含 0.1% 吐温 20 的 PBS
孵育缓冲液: 含 BSA 和 0.1% 吐温 20 的 PBS
柠檬酸缓冲液: 2 g/L 柠檬酸,用 1 NNaOH 调节,pH 值为 6
储存条件(工作液): 抗体贮备液在 2℃ 至 8℃ 下可稳定储存 6 个月。
注: 避免反复冻融。
工作液: 细胞免疫荧光和流式细胞术的程序
当使用其他检测方法或样品材料时,条件可能会发生变化,必须适应。
应用时,用孵育缓冲液 (M30 CytoDEATH) 稀释抗体储备液。
注: 抗体溶液应无沉淀。如有必要,使用前高速离心溶液。
免疫荧光和流式细胞术程序所需的附加工作液:
清洗缓冲液: 含 0.1% 吐温 20 的 PBS
孵育缓冲液: 含 BSA 和 0.1% 吐温 20 的 PBS
免疫组化程序
当使用其他检测方法或样品材料时,条件可能会发生变化,必须进行调整。
用孵育缓冲液稀释抗体储备液。
注: 抗体溶液应无沉淀。如有必要,使用前高速离心溶液。
工作溶液需要执行免疫组织化学染色程序:
清洗缓冲液: 含 0.1% 吐温 20 的 PBS
孵育缓冲液: 含 BSA 和 0.1% 吐温 20 的 PBS
柠檬酸缓冲液: 2 g/L 柠檬酸,用 1 NNaOH 调节,pH 值为 6
储存条件(工作液): 抗体贮备液在 2℃ 至 8℃ 下可稳定储存 6 个月。
注: 避免反复冻融。
短方案
对于福尔马林包埋组织:
细胞免疫荧光:
对于福尔马林包埋组织:
- 福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片脱蜡。
- 在柠檬酸缓冲液中加热回收抗原。
- 加入 M30 抗体。
- 加入抗小鼠生物素。
- 加入链霉亲和素-POD。
- 加入底物溶液(DAB 或 AEC)。
- 用 Harris 苏木精复染。
- 在光学显微镜下分析。
细胞免疫荧光:
- 固定细胞。
- 加入 M30 抗体。
- 加入抗小鼠 Ig-荧光素。
- 在荧光显微镜下分析。
用 550μl 冻干物复溶,得到抗体贮备液。
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
法律信息
M30 抗体根据瑞典 Peviva AB 的许可证协议生产。
我们的科学家团队拥有各种研究领域经验,包括生命科学、材料科学、化学合成、色谱、分析及许多其他领域.
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