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Merck
CN

RNAINH-RO

Roche

Protector RNase抑制剂

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别名:
RNase抑制剂, protector
UNSPSC代码:
41181611
NACRES:
NA.21

检测方案

>95% (SDS-PAGE)

质量水平

分子量

~50 kDa

包装

pkg of 10,000 U (03335402001 [5 x 2,000 U])
pkg of 2,000 U (03335399001)

制造商/商品名称

Roche

参数

25-55 °C optimum reaction temp.

pH值范围

5.0-9.0

储存温度

−20°C

一般描述

组分
Protector RNase抑制剂(40 U/μl)储存液:20 mM HEPES-KOH,50 mM KCl,8 mM 二硫苏糖醇, 50% 甘油(v/v)pH 7.6左右(+4°C)。
Protector RNase抑制剂可广泛灭活各种RNase,包括
  • RNase A
  • RNase B
  • RNase T2
因此,Protector RNase抑制剂可在任意存在RNases污染问题的应用中防止RNase降解。例如,其可以:
  • 在cDNA合成反应RT-PCR期间或体外转录/翻译反应过程中保护mRNA(在传统热循环和qPCR系统中)
  • 体外病毒复制期间保护病毒RNA
  • 在RNA分离纯化期间抑制核糖核酸酶
  • 用于RNase保护测定
  • 帮助制备不含RNase的抗体
注意:Protector RNase抑制剂通常不会影响用于制备或分析RNA的酶。

特异性

Protector RNase抑制剂完全不会对RNase T1与RNase 1造成影响。
Protector RNase抑制剂(20 U/ 20 μl反应)能够抑制多达1 ng RNase A,160pg RNase B以及0.03 U/μl(反应体系)RNase T2的活性。
RNase H的活性不受Protector RNase抑制剂的抑制。
热灭活:> 65 °C

应用

Protector RNase抑制剂可用于:
  • 在cDNA合成反应RT-PCR中保护mRNA(在传统热循环和qPCR系统中)例如,通过LightCycler®设备、体外转录/翻译系统、RNase保护测定、体外RNA合成等
  • 体外病毒复制期间保护病毒RNA
  • 在RNA分离纯化期间抑制核糖核酸酶
  • 帮助制备不含RNase的抗体
  • 合成用于原位杂交的RNA探针
可在任意RNase可能造成潜在问题的应用中发挥作用。

特点和优势

  • 基于热稳定性的RNase抑制剂:即使使用热稳定性逆转录酶(如Transcriptor逆转录酶)的条件下,Protector RNase抑制剂仍保持稳定。
  • 兼容广泛的反应条件:Protector RNase抑制剂在pH 5.0至9.0条件下和+25°C至+55°C的温度下都具有活性(+60°C时仍保留部分活性)。
  • 避免各种RNA分析应用中的干扰:即使升高到标准浓度的16倍仍保持正常效能。
  • 持续提供高纯度产物:每一批次的产品都进行严格质控流程,经实时定量RT-PCR等标准技术检测,确保不含核酸内切酶、核糖核酸酶或切割活性。

质量

每一批次的Protector RNase抑制剂均使用Titan One Tube RT-PCR试剂盒和LightCycler DPD试剂盒进行功能测试。Protector RNase抑制剂还经过污染活性测试,如下所述。
测试缓冲液:50 mM Tris-HCl,10 mM MgCl2,0.1 mM EDTA,7 mM β-巯基乙醇;pH 7.5 (+37°C)。
不含核酸内切酶:在+37°C下,将1 μg的λDNA-EcoR I/Hind III*片段与Protector RNase抑制剂在50 μl测试缓冲液中一起孵育1小时。“核酸内切酶(Endo)”部分描述了不会导致带型发生变化的抑制剂用量。
不含开口活性:在+37°C下,将1 μg的超螺旋pBR322 DNA与Protector RNase抑制剂在50 μl测试缓冲液中一起孵育1小时。“开口活性(Nick.Act.)”部分描述了不会导致超螺旋DNA松弛的抑制剂用量。
不含核糖核酸酶(1):在+37°C下,将5 μg的MS2 RNA与Protector RNase抑制剂在50 μl测试缓冲液中一起孵育1小时。“RNase 1”部分描述了不会导致MS2 RNA降解的抑制剂用量。
不含核糖核酸酶(2):在+37°C下,将5 μg的MS2 RNA与Protector RNase抑制剂在50 μl测试缓冲液中一起孵育1小时,然后在 +65°C孵育10分钟。“RNase 2”部分描述了不会导致MS2 RNA降解的抑制剂用量。

单位定义

1单位Protector RNase抑制剂定义为将5ng RNase A的活性抑制50%所需的酶量。

单位检测:按照Blackburn测试法,通过抑制环状胞苷-2':3'-单磷酸的水解测定活性。在实验条件下,200U的Protector RNase抑制剂能够将1 μg RNase A的活性抑制50%。

体积活性:40 U/μl

制备说明

工作浓度:
  • 一步法RT-PCR中使用5至10 U
  • 两步法RT-PCR中使用25至50 U
  • 体外转录使用20 U
如果您怀疑RNase污染会导致当前样本难以扩增,可在RT-PCR反应中应用更高浓度的Protector RNase抑制剂。抑制剂不会对反应效率造成干扰。(在测试系统中,即使抑制剂的使用浓度超出16倍
也不会对RT-PCR反应造成干扰。)

其他说明

产品详细说明:
来源:大鼠肺部;在大肠杆菌中进行重组
等电势点:pH 4.5
Protector RNase抑制剂的活性温度:25°C至+55°C;+60°C下仍具可测活力
失活条件:在强烈的变性条件(+65°C以上温度)下,本抑制剂将被失活
生物负载:<50 cfu/ml
DNA成份:<100 pg/mg
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

法律信息

购买注意事项:许可免责声明
本品针对聚合酶链式反应(PCR)进行了优化,后者由F. Hoffmann-La Roche Ltd ("Roche",)的专利所保护。在这些专利的保护下,购买本品的购买者不会以明示或暗示的方式获得PCR方法的使用许可。将PCR法用于某类研究或开发活动的许可,需通过购买Roche、Applied Biosystems及其他许可供应商的试剂,并配合在授权的PCR仪上使用来获得,也可通过联系Applied Biosystems来购买。(如用于)诊断目的则需要获得Roche的许可。如需购买许可方面的详细信息,请联系Applied Biosystems(850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA)的授权主管。
LightCycler is a registered trademark of Roche

储存分类代码

12 - Non Combustible Liquids

WGK

WGK 1

闪点(°F)

does not flash

闪点(°C)

does not flash

法规信息

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Germ cells are specified during early development and are responsible for generating gametes in the adult. After germ cells are specified, they typically migrate to a particular niche in the organism where they reside for the remainder of its lifetime.

实验方案

Protector RNase Inhibitor stabilizes RNA at -80°C without permeating intact cells, unsuitable for cell pellet addition.

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