末端转移酶

Name: 末端转移酶
Brand: ROCHE

from Calf Thymus, recombinant, E. coli

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About This Item

EC 号:

2.7.7.31 (BRENDA, IUBMB)

UNSPSC代码:

12352204

NACRES:

NA.21

重组

expressed in E. coli

质量水平

100

表单

solution

用途

sufficient for 20 reactions (03333566001)
sufficient for 60 reactions (03333574001)

包装

pkg of 24,000 U (03333574001 [400 U per reaction])
pkg of 8,000 U (03333566001 [400 U per reaction])

制造商/商品名称

Roche

应用

genomic analysis

储存温度

−20°C

一般描述

末端转移酶可催化模板独立地将脱氧和双脱氧核苷三磷酸加成到双链和单链DNA片段以及寡核苷酸的3′-OH 末端。末端转移酶可插入地高辛、生物素和荧光染料标记的脱氧和双脱氧核苷三磷酸以及放射性标记的脱氧和双脱氧核苷三磷酸。所提供的5倍浓缩反应缓冲液可实现对所有类型双链DNA末端的最佳加尾：带有3′的平末端；突出或带有5′突出。对于3′突出可获得最高的插入率。

应用

使用末端转移酶将核苷酸添加到双链或单链DNA片段的3′-OH末端，例如：

用dNTP加尾：向DNA片段添加同聚物尾
用放射性或化学修饰的核苷酸标记双链和单链DNA和寡核苷酸（如DIG-dUTP）

用ddNTP进行3′-末端标记：
用放射性或化学修饰的双脱氧核苷酸标记双链和单链DNA和寡核苷酸（如DIG-ddUTP）

特点和优势

插入标记或修饰的核苷酸
除标准的核苷酸外，末端转移酶将向DNA上添加放射性或修饰的（例如地高辛、生物素、或荧光染料标记）的dNTP或ddNTP。

包装

1个试剂盒包含3种组分

质量

根据现行的质量控制程序，经检测无5′和3′核酸外切酶、核酸内切酶，及切割活性。

原理

寡核苷酸是基于末端转移酶通过插入单个地高辛标记的双脱氧尿苷三磷酸而在其3′末端而进行标记的。标记寡核苷酸的另一种方法是添加更长的核苷酸尾。为了产生有尾寡核苷酸探针，脱氧核苷酸三磷酸被用于一种模板非依赖性的反应。

单位定义

一单位是指在检测条件下使用d(pT)₆作为引物，在+ 37℃时30分钟内将1nMol dTMP掺入酸性不溶性产物中的酶活。单位测定条件：在120 μl的反应体积中，200mM二甲胂酸钾、1mM CoCl₂、1mM dTTP、0.1 OD d(pT)₆、6.25pmol ³H dTTP。

单位测定条件：在120 μl的反应体积中，200mM二甲胂酸钾、1mM CoCl₂、1mM dTTP、0.1 OD d(pT)₆、6.25pmol ³H dTTP。

体积活动：400 U/μl

样品材料

双链或单链DNA片段
双链或单链DNA寡核苷酸

制备说明

工作溶液：用放射性核苷酸进行标准的加尾反应
制备CoCl₂工作溶液
向一支无菌小瓶中加入10 μl双蒸水和15 μl所提供的25 mM CoCl₂溶液：终浓度：15 mM

制备放射性标记混合液
dATP和dTTP标记混合液：将1倍体积的2.5 mM dATP或dTTP溶液于15倍体积的双蒸水以及4倍体积的α-³²P-dATP或α-³²P-dTTP（800 Ci/mmol，约30 TBq/mmol）进行混合。
dGTP和dCTP标记混合液：将1倍体积的2 mM dGTP或dCTP溶液与15倍体积的双蒸水以及4倍体积的α-³²P-dGTP或α-³²P-dCTP（800 Ci/mmol，约30 TBq/mmol）进行混合