SpongeCol^®

SpongeCol^® 是一种具有相互渗透的圆柱状多孔结构的胶原蛋白海绵。SpongeCol^® 包含独特的柱状多孔网络，该网络可使细胞和营养物质完全流过相互渗透的孔，并使得细胞附着、生长和迁移的表面积增加。它由高度纯化的 I 型胶原蛋白组成，可极好地支持细胞的附着、增殖和功能。胶原蛋白是轻度交联的，可提高短期和长期组织培养的机械强度和耐用性，但长期而言仍可生物降解。孔的直径为 100 至 400 微米，平均直径为约 200 微米。该产品经过最终灭菌，是即用型产品。

5135-25EA 的直径为 4 mm，厚度为 1.5 mm，可以放入 96 孔培养板孔中。每个包装包含 25 个胶原海绵盘。

5135-5EA 的直径为 21 mm，厚度为 1.5 mm，可以放入 12 孔培养板或医用鲁尔接头（用于进行血流灌注）中。每个包装包含 5 个胶原海绵盘。

使用说明

制备和细胞接种
注意：细胞附着在海绵上通常是组织培养中最关键的步骤。温度、pH、气体交换和细胞浓度会影响附着的速率和效率。最佳接种率取决于培养的细胞类型。
1.在层流工作站中，从包装中无菌地取出海绵盘。
2.使用无菌仪器将海绵小心地放入 12 孔组织培养板的孔中。转移海绵时，请注意不要损坏海绵。建议使用未经处理的组织培养塑料器皿。
注意：组织包被的塑料器皿可能需要用琼脂糖包被，以防止细胞附着在塑料而不是海绵上。
3.以所需浓度（1x10⁴ – 1x10⁵ 个细胞/mL）悬浮细胞，并分配足够量的细胞溶液于已置于孔中的海绵上。
注意：另一种方法是将细胞悬浮在中和的胶原蛋白溶液中（例如 PureCol^™ I 型胶原蛋白，货号 #5006 或 PureCol^™ EZ Gel，货号 ＃5074）。将胶原蛋白/细胞溶液分配到已置于孔中的海绵上。
4.转移到 37°C 的培养箱中约 1-2 小时，进行初始细胞附着。
注意：如果使用胶原蛋白悬浮法，胶原蛋白会在 37°C 聚合，并将您的细胞包裹在胶原蛋白基质和海绵中。
5. 1-2 小时后，从培养箱中取出培养皿并检查细胞附着情况。可能需要进行其他测试对细胞附着在海绵上所需的时间进行优化。检查细胞形态。细胞的黏附和扩散将决定附着的时间。
6.一旦细胞充分附着在海绵上，增加每个孔的最终体积以完全覆盖并为培养系统提供足够的培养基。

更换培养基
1.初始接种后 12-24 小时更换培养基。更换培养基的频率将取决于细胞类型、细胞附着效率、pH（保持在 7.0 到 7.4 的 pH 值），以及培养物对可用的营养成分的利用情况。与 2D 培养系统相比，可能需要更频繁的更换培养基。

细胞收获
注意：蛋白酶消化是从海绵中释放细胞的标准方法。细胞在胶原海绵上的附着强度因细胞系而异。酶的浓度和消化时间将根据酶的活性和细胞的融合而变化。胶原酶和/或胰蛋白酶可能是首选方法。
1.用 EDTA-PBS 洗涤海绵可以帮助蛋白酶消化。添加足够的体积覆盖海绵。
2.从孔中吸出 EDTA-PBS 溶液。
3.向孔中加入足够的消化液，完全覆盖海绵。
4.转移到 37°C 的培养箱中。定期检查细胞是否分离。
5.细胞完全分离后，取出细胞并分配到离心管中。
6.根据需要离心细胞。

PureCol is a trademark of Advanced BioMatrix, Inc.

SpongeCol is a registered trademark of Advanced BioMatrix, Inc.