A549 细胞 GFP-EGFR

A549 GFP-EGFR 是肺癌，来自于一个 ZFN 修饰的 58 岁男性白种人的上皮细胞，产生了内源性 EGFR 基因位点表达的 EGFR-GFP 转基因。

该细胞系来自 ATCC 产品号：CCL-185。

糖皮质激素是诱导 A549 细胞对 OSM（抑癌蛋白M）、白细胞介素 (IL-6) 和成纤维细胞条件培养基产生应答所必需的。EGFR 基因定位于人类染色体 7p11.2，编码一个 170属于受体酪氨酸激酶 HER 家族的 kDa 受体蛋白。 Egfr 定位于上皮细胞表面。

A549 细胞 GFP-EGFR 是利用 CompoZr ^® 锌指核酸酶技术将基因组 EGFR 基因内源性标记绿色荧光蛋白基因 (GFP) 的 A549 细胞系。整合导致内源性表达融合蛋白，其中 GFP 连接到 EGFR 的 C 端。荧光成像显示特征性 EGFR 膜表达。加入 EGF 后，细胞系显示 EGFR 从细胞膜再分布到核内体，使其可用于化合物的高含量筛选。例如，EGFR 的选择性抑制剂 Tyrphostin AG 1478 可消除再分布。该稳定细胞系从单个克隆中扩增。与通过外源启动子过表达的细胞系相比，该靶标的基因调控和相应的蛋白功能得以保留。

锌指核酸酶 (ZFN) 介导的荧光 GFP 标记靶向集成到染色体 7p11.2 上 EGFR 基因的最后一个编码外显子，以创建一个细胞系，该细胞系表现出用 GFP 标记的转基因在蛋白 C 端稳定表达。

这些 A549 细胞可贴壁，倍增时间约为 22 小时。

媒介更新每周更换两到三次。

通过在 37°C 水浴中轻轻搅拌（约 2 分钟）快速解冻小瓶，使瓶盖远离水。用 70% 乙醇消毒，加入 9 mL 培养基并离心 125 xg（5-7 分钟）。在完全培养基中重悬，并在 37℃、5% CO2 大气环境中孵育。

传代培养比例：约 1:3-1:6

该细胞系的基础培养基为 RPMI-1640，（产品号：R0883。为制备完全生长培养基，向基础培养基中加入以下组分：胎牛血清， 产品号：F2442 ，至终浓度 (v/v) 10%，L-谷氨酰胺， 产品号：G7513 ，最终浓度为 2 mM。

细胞冷冻培养基-DMSO 1X， 产品号：C6164。

检测支原体、无菌性、冷冻后活力、细胞系鉴别的短末端重复序列 (STR) 分析、细胞系种属确认的细胞色素氧化酶 I (COI) 分析。

CompoZr is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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