CRISPR UNIVERSAL NEGATIVE CONTROL 2

通用CRISPRs阴性对照被设计为不能被人类，小鼠或大鼠基因组识别。单个载体形式包括Cas表达盒和gRNA序列。GFP通过2A肽段连接，与Cas9切口酶蛋白的相同mRNA共表达，实现了对转染效率的追踪，也能通过荧光激活细胞分选术（FACS）对细胞群落进行富集。

Functional Genomics/Target Validation

• Creation of gene knockouts in cell lines
• Creation of knock-in cell lines with promoters, fusion tags or reporters integrated into endogenous genes

无需特定的靶向CRISPR/Cas9 系统，即可表达Cas9和GFP。

1 管包含1μg 表达非靶向向导序列的U6-gRNA/CMV-Cas9-GFP 质粒。

CRISPR/Cas 是细菌和古细菌的一种防御系统，可用来对抗入侵的病毒和质粒。来自酿脓链球菌的II型CRISPR/Cas系统包含两种分子元件，即一个Cas9蛋白和一个非编码向导RNA（gRNA），该系统经过基因改造而被用于真核系统中。Cas9 核酸内切酶可在单个gRNA的引导下，在指定基因组位置上引入DNA双链断裂（DSB）。与锌指核酸酶（ZFN）诱导的DSB相似，细胞随后会激活内源性DNA修复程序，即非同源性末端接合（NHEJ）或同源重组修复机制（HDR），对目标DSB进行修复。

Sigma U6-gRNA/CMV-Cas9-GFP 质粒表达非靶向的向导序列，以浓度 20ng/μl in 50μl的溶液形式提供。

Sigma CRISPR质粒产品为小量提取包装，
可能不适用于转染到特殊类型的细胞中。为得到最佳结果，我们建议
在转染前使用无内毒素的DNA纯化试剂盒大量提取质粒。

文献中使用的标准转染浓度范围为2~8μg的单个的表达向导RNA和Cas9的载体。（上述所有浓度均假设是对0.5~1百万个细胞进行核转染）

CRISPR专利正在申请中