DNA连接试剂盒

Sigma 的 DNA 连接试剂盒包含进行 DNA 连接反应所需的所有试剂。粘性末端连接比平末端连接更有效。加入 PEG 可促进这些反应。

适用于：

• 将 DNA 片段连接到克隆载体中
• 诱变
• 基因分析与结构功能关系

克隆过程中最重要的步骤之一是将线性 DNA 连接到克隆载体中。在缓冲液、ATP 和 DNA 连接酶的存在下，通过将 DNA 片段与适当线性化的克隆载体孵育可进行 DNA 连接。插入物与载体的相对比例、DNA 末端的质量和类型、连接温度和 DNA 浓度等多种参数会影响连接。

足以进行 150 次反应：

• 在 250 mM Tris-HCl（pH 7.8），100 mM MgCl2 和 10 mM 二硫苏糖醇中的 300uL 10X 连接缓冲液（D2176）
• 含有 3 x 100 单位 T4 DNA 连接酶（D2886），10 mM Tris-HCl，pH 7.5，50 mM KCl 和 1 mM 二硫苏糖醇的 50％ 甘油溶液
• 3 x 100 uL 10 mM ATP（A3702）
• 50μL 对照 pBR322 DNA，HAE III Digest（D9430）浓度为 0.5 ug/ul，溶于 10 mM Tris-HCl（pH 8.0）和 1 mM EDTA 中
• 1.5 mL 24％（w/v）PEG 溶液，（P 2454）
• 1.5 mL 分子生物学级水（W4502）