TEV蛋白酶, 生物素标记

TEV蛋白酶是一种来自烟草蚀刻病毒的高度序列特异性丝氨酸蛋白酶。由于其高特异性，TEV蛋白酶被广泛用于切割重组融合蛋白。TEV蛋白酶切割的最佳序列是ENLYFQ\S，但是，TEV蛋白酶在具有EXLYFΦQ\ϕ共有序列的一系列底物上具有活性，其中X是任何残基，Φ是任何大或中等疏水残基，并且ϕ是任何小的疏水或极性残基（即甘氨酸，丝氨酸，丙氨酸，缬氨酸，半胱氨酸）。体外去除融合标签是TEV蛋白酶最常使用的。

该生物素标记的TEV蛋白酶在大肠埃希菌中表达。我们的生物素标记的TEV蛋白酶除生物素外不带有任何纯化标签，旨在用于柱上切割包含TEV蛋白酶识别序列的融合蛋白。该方法特异性地从柱结合的融合蛋白上切割目的蛋白，留下结合到亲和柱（例如Ni-NTA柱）上的纯化结构域或标签，并且仅洗脱目的蛋白。
由于以下几个原因，该方法有利于洗脱后裂解：

• 它消除了通常与亲和纯化相关的大多数杂质。
• 它允许更温和的洗脱条件，并增加了洗脱缓冲液组成的灵活性。这可以帮助防止蛋白质聚集和失活。

切割后，可以用任何抗生物素蛋白偶联的或抗生蛋白链菌素偶联的珠去除生物素化的TEV蛋白酶。

该产品的生物素化是通过酶促进行的，对其蛋白水解活性没有影响。它没有其他蛋白纯化标签。该产品在含有20 mM Tris HCl（pH 7.5），50 mM氯化钠，1 mM TCEP，1 mM EDTA和50%（v/v）甘油的水性缓冲液中以=10 U/μl的浓度提供。

在pH 8.0和30℃条件下，一单位的TEV蛋白酶可在一小时内切割>85%的3 μg对照底物。