pZerve^™

pZerve 是一种不含二甲基亚砜 (DMSO)、胎牛血清或其他动物蛋白的冷冻保存液。通过消除这些有害成分，达到最佳恢复率。pZerve 即用型，不需要任何稀释或进一步处理，可用于无血清培养基或含血清培养基培养的细胞。

pZerve 已成功用于以下细胞类型，包括但不限于：

• 肥大细胞
• 树突细胞
• 间充质细胞
• LNCaP – 人转移性前列腺腺癌
• LS 180– 人结肠，腺癌
• 293– 人转化的原代胚胎肾

推荐的冻融方案

冷冻 ：
1. 检查培养物是否健康生长、融合等。而且没有污染。
2. 如果冻存贴壁细胞，37°C 下用 0.25% 胰蛋白酶去除 1 ~ 3 分钟。
注：在无血清培养基中生长的一些细胞系可能对 0.25% 胰蛋白酶敏感，因此可能需要较少的胰蛋白酶或添加胰蛋白酶抑制剂。用胰蛋白酶孵育后清洗细胞。
3. 进行细胞计数，测定活细胞总数。细胞存活率应大于 80%，细胞应处于对数生长期晚期或融合前生长期。
4. 600～800 rpm 离心细胞 10 分钟。去除上清液，保存 3-5 mL 用于无菌检查（例如硫乙醇酸盐、脑心浸液等）和支原体检查。
5. 将细胞轻轻重悬在适当体积的 pZerve 中，浓度为每毫升 1 x 10 ⁶ -1 x 10 ⁷ 个细胞。一些细胞类型如杂交瘤和骨髓瘤可能需要增加细胞密度。
6. 将细胞悬液分装于塑料或玻璃安瓿中，每份 1-2 mL。
7. 密封安瓿，室温保存 30 分钟，时不时轻轻搅拌，使细胞完全暴露于冷冻保存液中。
8. 将安瓿置于保温容器中，-20℃ 冰箱保存一小时。除去绝缘层，转移至-70℃ 冰箱中 1 小时。不得在-70℃ 下储存超过两小时。将小瓶转移至气相液氮中，并储存 24 小时，然后转移至液相中。建议大多数细胞类型的最佳冷却速率为每分钟 1°C。

恢复：
1. 从冰柜中取出小瓶，37℃ 水浴中迅速解冻。
2. 用 70% 乙醇擦拭药瓶。
3. 将细胞转移到培养瓶中，缓慢加入适当体积的生长培养基 (2～5 mL)。
4. 37°C 下回收至少 2 小时后，应进行准确的活力计数（即台盼蓝染料排斥）。
5、24 小时内应更换培养基。

如果需要，可通过以下方式清洗去除 pZerve：
1. 将细胞转移至 15 mL 离心管中，缓慢加入 2～3 mL 完全生长培养基（解冻后细胞较脆弱）。
2. 400 ~ 600 rpm 离心约 5 分钟。
3. 倾去细胞，转移至装有适当体积生长培养基的培养瓶中。
4. 细胞活性计数应在恢复后至少两小时进行。

重要提示： 在终止培养之前，建议您检测整个冻融循环，以确保培养物的无菌性和长期储存前的细胞活力。

pZerve is a trademark of Protide Pharmaceuticals, Inc.