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主页Products蛋白生物学蛋白质电泳和免疫印迹免疫检测试剂和底物

免疫检测试剂和底物

Immobilon®Forte、Crescendo 和 Classico 化学发光 Western 印迹底物

在 Western 印迹技术中,决定实验成败的最重要因素是所用试剂的质量。我们提供一系列预优化的 Western 印迹试剂,它们能协同工作,提供强特异性信号和低背景,帮助您快速获得发表级的结果。


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阻断试剂

阻断未结合的膜位点可防止抗体的非特异性结合导致高背景。传统的牛奶、明胶和其他基于蛋白质的阻断剂对许多印迹应用都很有效,但会掩盖信号或干扰特定蛋白质目标的检测,从而降低灵敏度或检测率。 Immobilon® 阻断噪音消除试剂 包括不含蛋白质的即用型缓冲液,经过优化可在使用化学发光、荧光或磷蛋白检测时降低背景水平。

链霉亲和素和二抗轭合物

现代免疫检测方法以酶联检测为基础,使用与辣根过氧化物酶 (HRP) 或碱性磷酸酶 (AP) 等酶共价结合的链霉亲和素或二抗。共轭酶催化特定底物的降解,从而产生信号。多种链霉亲和素、蛋白 A、蛋白 G 和二抗轭合物可用于 Western 印迹。我们还提供多种 HRP 和 AP 底物供 Western 印迹中的化学发光、显色和化学荧光检测使用。

用于西部印迹的化学发光底物

Immobilon®

  • Immobilon®Classico、Crescendo 和 Forte 化学发光底物
    • Immobilon® Classico: ~ 6 pg target protein
    • Immobilon® Crescendo: ~ 1-3 pg target protein
    • Immobilon® Forte: ~400 fg 目标蛋白
       
  • Immobilon®Western HRP、Immobilon® ECL Ultra 和 Immobilon® UltraPlus Western 底物在标准的双组分格式中具有极高的灵敏度和较长的信号寿命。这些配方允许使用更稀释的一抗溶液进行免疫印迹检测。检测限:
    • Immobilon® Western HRP 底物:~ 400 fg 目标蛋白质
    • Immobilon® ECL Ultra 底物:低飞摩克范围
    • Immobilon® ECL UltraPlus Western Blot HRP 底物:低飞克范围

Immobilon®化学发光 HRP 底物的相对灵敏度

两倍稀释显示用于 Western 印迹的 Immobilon® 化学发光底物的相对灵敏度,包括:Classico(灵敏度较低)、Crescendo、Forte、Ultra 和 UltraPlus(灵敏度最高):Classico(灵敏度较低)、Crescendo、Forte、Ultra 和 UltraPlus(灵敏度最高)。

图 1.以 4 μg 蛋白为起点,将 A431 细胞裂解液 [12-110] 的两倍稀释系列在 10%mPAGE®凝胶 [MP10W15] 上以 200V 电压在 MOPS 缓冲液 [MPM0PS] 中运行 25 分钟。蛋白在含 10%乙醇的 mPAGE® 转印缓冲液 [MPTRB] 中转印至 Immobilon®-P 膜 [IPVH00010] 1 小时。用兔抗 HH3 [H0164] 和山羊抗兔[AP132P] 抗体按所列稀释度对 HH3 蛋白(15 kDa)进行免疫检测。在 Bio-Rad® ChemiDoc 系统上用指定的 ECL 试剂孵育印迹 5 分钟,曝光 30 秒后拍摄图像。

Cytiva™ Amersham™ ECL检测试剂使用基于增强型发光酚的HRP检测,有不同的配方可供选择,以满足不同的Western印迹应用需求。

  • Cytiva Amersham™ ECL Western 印迹检测试剂推荐用于确证性 Western 印迹应用。
  • Cytiva Amersham™ ECL Prime Western 印迹检测试剂可在同一张印迹上检测高丰度和低丰度蛋白质。
  • Cytiva Amersham™ ECL Select Western 印迹检测试剂即使使用稀释的一抗和二抗也能提供高灵敏度。
  • Cytiva Amersham™ ECL Start Western 印迹检测试剂专为化学发光检测中高表达蛋白而开发。

用于 Western 印迹的致色底物

致色检测利用过氧化物酶(如:HRP)或碱性磷酸酶(AP)共轭酶催化反应,沉淀出不溶性的有色沉淀进行检测、我们用于 Western 印迹的致色底物有溶液、粉末和片剂三种形式,为储存和使用提供了灵活的选择。

  • SIGMAFAST™ DAB 片剂(显色性 HRP 底物由比色沉淀底物组成,与辣根过氧化物酶反应后产生棕色,可溶解于水,制备成即用型缓冲溶液,用于印迹检测。
  • BCIP/NBT (蓝/紫)和 BCIP/TNBT (蓝/棕)单试剂(显色 AP 底物)是高灵敏度的碱性磷酸酶比色底物。
  • TMB增强型单组分HRP膜底物(显色性HRP底物)是一种单组分比色底物,可产生深蓝色产物。

信号增强剂

  • Immobilon® 信号增强剂 设计用于观察到低信号强度时的 Western 印迹应用。 信号增强剂 设计用于观察到低信号强度时的 Western 印迹应用。增强抗体-抗原反应可使信号强度增加 2 到 10 倍。Immobilon® 信号增强剂与 PVDF 和硝酸纤维素膜兼容,可用于显色、化学发光和荧光检测方法。
  • SignalBoost™ Immunoreaction Enhancer Kit is designed to enhance chemiluminescent or colorimetric target signal on nitrocellulose or PVDF membranes

用于剥离和再探针的试剂和试剂盒

剥离和再探针试剂经特殊配制,可快速有效地去除 Western 印迹中的抗体,而不会对固定蛋白产生明显影响。

  • ReBlot™Plus试剂可有效剥离探针印迹上结合的抗体。ReBlot™ Plus 试剂有温和型和强效型两种配方。

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