为了发生静电滞留,分析物和吸附剂官能团都必须处于其离子化的离子交换方法形式。这是通过对样品基质进行严格的pH控制来完成的。对于碱性分析物,pH值应调整到至少比分子pKa低2个pH单位。对于酸性分析物,pH值应调整到分子pKa以上至少2个pH单位。
要洗脱,恰恰相反。通过将洗脱液的pH调节至高于或低于分析物和/或吸附剂的pKa的至少两个pH单位,可以有效地中和破坏静电相互作用的一个或两个官能团,从而允许发生洗脱。
注意:由于样品和吸附剂官能团之间的动力学交换过程对于离子交换比正常和反相要慢得多,所以流速应该是下降的(约1滴/秒)。一个可能还需要增加洗脱和洗涤体积,让流动相和固定相有足够的停留时间相互作用。
图 1.离子交换方法
抗衡离子选择性定义为抗衡离子能够与其他抗衡离子竞争离子交换剂官能团的程度。通过使吸附剂和/或样品基质比与分析物官能团选择性低的抗衡离子预先平衡(最小竞争)有助于保留。通过使用具有比分析物官能团更具选择性的抗衡离子缓冲液有利于分析物洗脱。
对于阳离子交换剂:
对于阴离子交换剂:
要转变为更高的选择性离子,通过吸附剂2-5个床体积的1N新抗衡离子溶液。若要改用较低的选择性离子,请将5-65倍床柱体积的1N新抗衡离子溶液通过吸附剂。
注意:床柱体积的数量取决于新的抗衡离子比吸附剂上的现有抗衡离子选择性低多少。
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