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Merck
CN
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About This Item

UNSPSC代码:
12352204
eCl@ss:
32160405
NACRES:
NA.75
技术服务
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生物来源

Escherichia coli

质量水平

重组

expressed in E. coli

方案

>70% (SDS-PAGE)

表单

liquid

技术

cell culture | stem cell: suitable

运输

dry ice

一般描述

Cre重组酶是一种来自噬菌体P1的酶,可催化两个称为loxP位点的DNA识别位点之间的位点特异性重组。 LoxP识别位点由两个13 bp的反向重复序列组成,两侧是8 bp的间隔区。 由于Cre基因和loxP位点不是大多数物种的基因组所固有的,因此可以对loxP位点进行工程改造并将其引入靶细胞,从而用作精确控制体外(即培养的细胞)和体内(即动物模型)基因表达的手段。

• 如果LoxP位点位于不同的染色体上,则Cre重组酶将介导染色体易位。
• 如果LoxP位点的方向相反,则Cre重组酶将介导floxed片段的倒置。
• 如果LoxP位点的方向相同,则Cre重组酶将介导floxed片段的缺失。

这样,LoxP位点的放置可以激活,抑制或交换其他基因。

EMD Millipore’s TAT-CRE重组酶是一种重组细胞渗透性融合蛋白,由衍生自HIV-TAT(TAT)的碱性蛋白易位肽、核定位序列(NLS)、Cre蛋白和N端组氨酸标签(H6)组成,用于有效纯化大肠埃希菌中的蛋白质。

EMD Millipore’s TAT-CRE重组酶已显示可从人和小鼠IPS细胞中有效切除STEMCCA病毒转基因。

应用

EMD Millipore开发了一种细胞可渗透性的TAT-CRE重组酶融合蛋白,该蛋白可直接递送至哺乳动物细胞并产生高重组效率(小鼠中为75–100%,人细胞中为~60%)。 TAT-CRE易转移到哺乳动物细胞中,并可以催化高效重组。 可以精确控制Cre暴露的剂量和时间,从而可以仔细滴定Cre活性。

外形

重组蛋白溶于含有50%甘油(v/v)、500 mM NaCl和20 mM HEPES的缓冲液(pH 7.4)中。

制备说明

在-20°C或-80°C下储存时,自接收之日起3个月内保持稳定。 首次解冻后,离心小瓶并轻轻混合溶液。 分装成较小的工作体积,并在-20°C或-80°C下冷冻。 使用前,用培养基将TAT-CRE稀释至适当浓度,并通过0.2 um低蛋白结合针式过滤器(Millipore目录号SLGV 033RS或SLGV013 SL)过滤。

分析说明

每批次TAT-CRE重组酶蛋白都经过以下严格的质量控制测试,其参数为:

  • 纯度:SDS-PAGE凝胶上蛋白纯度大于70%的约41 kDa的单条带
  • 功能活性:介导HEK293T-Cre报告细胞系中loxP修饰等位基因的重组
  • 内毒素水平:小于1 Eu/ug蛋白

其他说明

100个单位的标准定义为在HEK293T loxp报告基因细胞系分析中诱导50%GFP表达所需的1.0 mL组织培养基中TAT-CRE(ug)的量。

储存分类代码

10 - Combustible liquids

WGK

WGK 1


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