TAT-CRE 重组酶

Cre重组酶是一种来自噬菌体P1的酶，可催化两个称为loxP位点的DNA识别位点之间的位点特异性重组。 LoxP识别位点由两个13 bp的反向重复序列组成，两侧是8 bp的间隔区。 由于Cre基因和loxP位点不是大多数物种的基因组所固有的，因此可以对loxP位点进行工程改造并将其引入靶细胞，从而用作精确控制体外（即培养的细胞）和体内（即动物模型）基因表达的手段。

• 如果LoxP位点位于不同的染色体上，则Cre重组酶将介导染色体易位。
• 如果LoxP位点的方向相反，则Cre重组酶将介导floxed片段的倒置。
• 如果LoxP位点的方向相同，则Cre重组酶将介导floxed片段的缺失。

这样，LoxP位点的放置可以激活，抑制或交换其他基因。

EMD Millipore’s TAT-CRE重组酶是一种重组细胞渗透性融合蛋白，由衍生自HIV-TAT（TAT）的碱性蛋白易位肽、核定位序列（NLS）、Cre蛋白和N端组氨酸标签（H6）组成，用于有效纯化大肠埃希菌中的蛋白质。

EMD Millipore’s TAT-CRE重组酶已显示可从人和小鼠IPS细胞中有效切除STEMCCA病毒转基因。

EMD Millipore开发了一种细胞可渗透性的TAT-CRE重组酶融合蛋白，该蛋白可直接递送至哺乳动物细胞并产生高重组效率（小鼠中为75–100%，人细胞中为~60%）。 TAT-CRE易转移到哺乳动物细胞中，并可以催化高效重组。 可以精确控制Cre暴露的剂量和时间，从而可以仔细滴定Cre活性。

重组蛋白溶于含有50%甘油（v/v）、500 mM NaCl和20 mM HEPES的缓冲液（pH 7.4）中。

在-20°C或-80°C下储存时，自接收之日起3个月内保持稳定。 首次解冻后，离心小瓶并轻轻混合溶液。 分装成较小的工作体积，并在-20°C或-80°C下冷冻。 使用前，用培养基将TAT-CRE稀释至适当浓度，并通过0.2 um低蛋白结合针式过滤器（Millipore目录号SLGV 033RS或SLGV013 SL）过滤。

每批次TAT-CRE重组酶蛋白都经过以下严格的质量控制测试，其参数为：

• 纯度：SDS-PAGE凝胶上蛋白纯度大于70%的约41 kDa的单条带
• 功能活性：介导HEK293T-Cre报告细胞系中loxP修饰等位基因的重组
• 内毒素水平：小于1 Eu/ug蛋白

100个单位的标准定义为在HEK293T loxp报告基因细胞系分析中诱导50%GFP表达所需的1.0 mL组织培养基中TAT-CRE(ug)的量。