biological source
rabbit
Quality Segment
antibody form
serum
antibody product type
primary antibodies
clone
polyclonal
species reactivity
yeast, Saccharomyces cerevisiae, human
species reactivity (predicted by homology)
vertebrates (most common)
manufacturer/tradename
Upstate®
technique(s)
ChIP: suitable (ChIP-seq), dot blot: suitable, western blot: suitable
NCBI accession no.
UniProt accession no.
shipped in
dry ice
target post-translational modification
acetylation (Lys18)
Gene Information
human ... H3C1(8350)
General description
组蛋白H3是参与真核细胞染色质结构的5种主要组蛋白之一。H3具有一个主要的球状结构域和一个长N末端的尾巴,其与核糖体核小体′串珠′结构体的结构有关。
组蛋白H3的乙酰化发生在组蛋白尾部的几个不同的赖氨酸位置,并由称为组蛋白乙酰基转移酶(HATs)的酶家族完成。
组蛋白H3的乙酰化发生在组蛋白尾部的几个不同的赖氨酸位置,并由称为组蛋白乙酰基转移酶(HATs)的酶家族完成。
17 kDa
Immunogen
KLH缀合的合成肽(GKAPRAcKQLASK-C),对应于在赖氨酸18上乙酰化的酵母组蛋白H3的氨基酸13-23,并添加了C端半胱氨酸便于进行缀合。
Application
使用在ChIP,WB中验证的抗乙酰基-组蛋白H3(Lys18)抗体(兔多克隆抗体)检测乙酰基-组蛋白H3(Lys18),也称为H3K18Ac,组蛋白H3(乙酰化K18)。
染色质免疫沉淀:
代表性批次数据。
使用2 µL正常兔血清或2 µL抗乙酰化组蛋白H3(Lys18)和Magna ChIP A试剂盒(目录号17-610),对从HeLa细胞制备的超声染色质(每IP 1 X 10e6细胞当量)进行染色质免疫沉淀。 使用对人GAPDH启动子区域特异的对照引物作为阳性基因座,并使用β-珠蛋白引物作为阴性基因座,通过qPCR验证了乙酰基组蛋白H3(Lys18)相关DNA片段的成功免疫沉淀。 数据表示为每个IP样品相对于每个扩增子和ChIP样品的输入染色质的输入百分比。
请参阅EZ-Magna ChIP A(目录号17-408)或EZ-ChIP(目录号17-371)协议以获取实验详细信息。
ChIP测序:
代表性批次数据。使用Magna ChIP HiSens试剂盒(目录号17-10460),2 μL抗乙酰化组蛋白H3(Lys18)抗体(目录号07-354),20 µL蛋白A/G珠和1e6交联 HeLa细胞染色质进行染色质免疫沉淀,然后使用磁珠进行DNA纯化。使用标准规程从Input和ChIP DNA样品制备文库,带Illumina条形码适配器,并在Illumina HiSeq仪器上进行分析。在去除 TagDust(http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource)标签后,使用 Bowtie(http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml)映射了FastQ文件中的超过1000万次读取。使用 MACS(http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/)识别峰,并从 BigWig 和 BED 文件在 UCSC Genome Browser(http://genome.ucsc.edu)中以自定义轨道的形式显示峰和读数。
蛋白质印迹分析:
代表性批次数据。
用抗乙酰基组蛋白H3(Lys18)(1:10,000稀释度)探测重组组蛋白H3(泳道1,目录号14-494)以及丁酸钠处理(泳道2)和未处理(泳道3)HeLa细胞(目录号17-305)的酸提取物。
箭头表示乙酰基组蛋白H3(Lys18)(17 kDa)。
斑点印迹:
代表性批次数据。
将40 ng和4 ng量的不同修饰的组蛋白肽(见表1)转移至PVDF膜上,并用抗乙酰基组蛋白H3(Lys18)抗体(1:5000稀释度)进行探测。使用与HRP偶联的山羊抗兔IgG和化学发光检测系统可视化蛋白质。显示了60秒曝光的图像。
代表性批次数据。
使用2 µL正常兔血清或2 µL抗乙酰化组蛋白H3(Lys18)和Magna ChIP A试剂盒(目录号17-610),对从HeLa细胞制备的超声染色质(每IP 1 X 10e6细胞当量)进行染色质免疫沉淀。 使用对人GAPDH启动子区域特异的对照引物作为阳性基因座,并使用β-珠蛋白引物作为阴性基因座,通过qPCR验证了乙酰基组蛋白H3(Lys18)相关DNA片段的成功免疫沉淀。 数据表示为每个IP样品相对于每个扩增子和ChIP样品的输入染色质的输入百分比。
请参阅EZ-Magna ChIP A(目录号17-408)或EZ-ChIP(目录号17-371)协议以获取实验详细信息。
ChIP测序:
代表性批次数据。使用Magna ChIP HiSens试剂盒(目录号17-10460),2 μL抗乙酰化组蛋白H3(Lys18)抗体(目录号07-354),20 µL蛋白A/G珠和1e6交联 HeLa细胞染色质进行染色质免疫沉淀,然后使用磁珠进行DNA纯化。使用标准规程从Input和ChIP DNA样品制备文库,带Illumina条形码适配器,并在Illumina HiSeq仪器上进行分析。在去除 TagDust(http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource)标签后,使用 Bowtie(http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml)映射了FastQ文件中的超过1000万次读取。使用 MACS(http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/)识别峰,并从 BigWig 和 BED 文件在 UCSC Genome Browser(http://genome.ucsc.edu)中以自定义轨道的形式显示峰和读数。
蛋白质印迹分析:
代表性批次数据。
用抗乙酰基组蛋白H3(Lys18)(1:10,000稀释度)探测重组组蛋白H3(泳道1,目录号14-494)以及丁酸钠处理(泳道2)和未处理(泳道3)HeLa细胞(目录号17-305)的酸提取物。
箭头表示乙酰基组蛋白H3(Lys18)(17 kDa)。
斑点印迹:
代表性批次数据。
将40 ng和4 ng量的不同修饰的组蛋白肽(见表1)转移至PVDF膜上,并用抗乙酰基组蛋白H3(Lys18)抗体(1:5000稀释度)进行探测。使用与HRP偶联的山羊抗兔IgG和化学发光检测系统可视化蛋白质。显示了60秒曝光的图像。
Biochem/physiol Actions
识别赖氨酸18乙酰化的组蛋白H3。
Physical form
含有0.05%叠氮化钠和30%甘油的100 μL兔血清。
Analysis Note
通过免疫印迹法对丁酸钠处理过的HeLa细胞的酸提取物进行了常规评估
Other Notes
替代:04-1107
浓度:请参考批次特异性浓缩物的分析证书。
Legal Information
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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12 - Non Combustible Liquids
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