一级抗体

图 1.使用一抗-β-肌动蛋白抗体进行免疫细胞化学染色的示例。

一抗在定位、检测、识别和量化目标分子方面发挥作用。它们直接与感兴趣的抗原蛋白结合。一抗可以以多克隆抗体、单克隆抗体或重组抗体的形式生产。

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多克隆抗体是通过给动物注射感兴趣的抗原产生的。几周后，动物的血清被收集起来，既可以直接使用，也可以进一步纯化以分离抗体。多克隆抗体通常能识别多个表位，因此对抗原性质的微小变化更有耐受性。

单克隆抗体是一种实验室制备的同源抗体，通过将B细胞与永生细胞培养物融合，产生杂交瘤，从而产生多份完全相同的抗体。它们能识别高度特异和独特的表位，具有很强的亲和力，降低了交叉反应的可能性。

重组抗体是将抗体基因克隆到表达载体中产生的单克隆抗体，不使用杂交瘤。这些抗体可以使用合适的寡核苷酸引物从任何物种中克隆。这项技术有助于避免与传统杂交瘤生产相关的细胞系漂移和突变等问题。

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共轭一抗通常用于信号放大和检测，而不使用第二抗体。一级单克隆或多克隆抗体可直接与荧光团、酶或生物素结合。不同的抗体共轭物表现出不同的稳定性，需要特定的缓冲液和储存条件才能长期保持其最大活性。

检测异常蛋白质和肿瘤相关抗原的一抗是癌症研究的重要工具。一些一抗可用于阻断致癌途径、刺激抗体依赖性细胞毒性（ADCC）和激活补体依赖性细胞毒性。这些抗体对研究肿瘤标志物、肿瘤抑制因子、侵袭、转移、自噬、细胞凋亡和血管生成至关重要，有助于深入了解癌症生物学和治疗的各个方面。

一抗在神经系统生理学和病理学研究中起着至关重要的作用，它允许研究人员鉴定和分析特定的蛋白质和细胞标记物。此外，这些抗体还有助于研究神经炎症，这是各种神经系统疾病的一个关键因素。

主要抗体还有助于研究基因开启和关闭的表观遗传过程。DNA甲基化和组蛋白翻译后修饰是主要的表观遗传因素。

一抗是用于研究蛋白质及其相互作用的各种实验室技术的基本工具。它们能在不同的实验技术中精确检测、定量和分析特定蛋白质，例如：

ELISA: A plate-based assay technique designed for detecting and quantifying soluble substances.它结合了抗体的特异性和简单酶测定的灵敏性。
Western Blotting：检测蛋白质混合物中的特定蛋白质分子。
免疫细胞化学：使用特异性识别相关目标的抗体来观察细胞中的蛋白质或其他抗原。
免疫组织化学：选择性地识别组织切片细胞中的抗原（蛋白质）。
免疫沉淀：使用与蛋白质特异性结合的抗体从溶液中沉淀蛋白质抗原。这种技术能从含有成千上万种不同蛋白质的样品中分离并浓缩出一种蛋白质。
流式细胞仪：检测和测量细胞群的物理和化学特征。光散射模式用于确定细胞的大小和细胞内的复杂性。
亲和力结合测定: 测量单个抗原与抗体之间结合相互作用的强度。数字越小，表示结合亲和力越强。