~11 kDa

对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物（通过qPCR对每个批次进行检测），以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体，以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+乙酰组蛋白H4(Lys5)套装包含乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体、阴性对照上清、qPCR引物（用于扩增人GAPDH的166bp区）。乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体和阴性对照的规格与ChIP反应次数成比例，可用于功能性验证乙酰组蛋白H4(Lys5)相关染色质的免疫沉淀。

组蛋白H4是参与真核细胞染色质结构的5种主要组蛋白之一。H4具有一个主要的球状结构域和一个长N末端的尾巴，其与核糖体核小体′串珠′结构体的结构有关。组蛋白H4的乙酰化发生在组蛋白尾部的几个不同的赖氨酸位置，并由称为组蛋白乙酰基转移酶（HATs）的酶家族完成。

对应组蛋白H4[GRG-AcK-GGK]序列的多肽，其中Lys5位点乙酰化。

表位：乙酰化Lys5

染色质免疫沉淀：
采用2 µL阴性对照上清液或2 µL抗乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体和Magna ChIP^® A试剂盒（货号17-610），对未处理HeLa细胞来源、超声处理的染色质（每次IP需1 X 10⁶细胞当量）进行染色质免疫沉淀。
采用质控引物（用于扩增人GAPDH启动子）或引物（用于扩增HeLa细胞中转录失活的人β-珠蛋白启动子），经qPCR反应鉴定乙酰组蛋白H4(Lys5)相关DNA片段，验证免疫沉淀实验成功。
数据表示为每个IP样本扩增子值相对于染色质输入(input)扩增子值的百分比(Percent Input)，ChIP样本如图所示。

实验详细信息请参阅EZ-Magna ChIP A（货号17-408）或EZ-ChIP（货号17-371）试剂盒方案。

蛋白质印迹分析：
代表性批次数据。
用1:1,000稀释的抗乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体检测未处理或丁酸钠处理的HeLa细胞裂解液（分别为泳道1和2）。
用山羊抗兔抗体进行蛋白显色。（见图）。

蛋白质印迹分析和肽抑制：代表性批次数据。
电泳分离丁酸钠处理HeLa细胞的酸提取物，转印至PVDF膜，用1:1000稀释的抗乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体检测。
为了验证抗体的特异性，用修饰的组蛋白H4肽预孵育血清：

泳道1：无多肽
泳道2：乙酰组蛋白H4(K5)（货号12-343）
泳道3：乙酰组蛋白H4(K8)（货号12-344）
泳道4：乙酰组蛋白H4(K12)（货号12-345）
泳道5：乙酰组蛋白H4(K16)（货号12-346）
泳道6：乙酰组蛋白H4(K5, 8, 12, 16)（货号12-353）
泳道7：组蛋白H4（货号12-347）

用HRP标记的驴抗兔IgG和化学发光检测系统对蛋白显色。（请参见图）。

研究子类别
组蛋白

研究类别
表观遗传学&核功能

该ChIPAb+乙酰基组蛋白H4(Lys5)-ChIP验证抗体&引物套装包含抗体&特异性对照PCR引物，使用方便。

由于序列相似性，预计具有广泛的交叉反应性。

识别Lys5位点乙酰化的组蛋白H4。

每组25次测定。推荐用于：每次染色质免疫沉淀约2 μL抗体（取决于生物学背景）。

抗乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体（兔多克隆IgG）。1瓶，50 μL兔单克隆IgG细胞培养上清液，含0.1%叠氮化钠。储存于 -20°C。

阴性对照上清液（兔）：1瓶，50 μL培养物上清液，含0.05%叠氮化钠。储存在-20 °C。

对照引物。1瓶，75 μL，人GAPDH启动子特异性引物各5μM。在-20°C下储存。
对于：TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
REV: TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG CGA

自收到之日起在-20°C可稳定保存1年。处理建议：第一次融化后，在取下瓶盖之前，将小瓶离心并轻轻混合溶液。分装到微量离心管中，并储存于-20°C。避免反复冻融循环，以免损坏IgG和影响产品性能。

对照
包括阴性对照上清和人GAPDH特定引物。

染色质免疫沉淀：
采用2 µL阴性对照上清液或2 µL抗乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体和Magna ChIP^® A试剂盒（货号17-610），对来自未处理HeLa细胞的超声处理的染色质（每次IP需1 X 10⁶细胞当量）进行染色质免疫沉淀。
使用针对人GAPDH启动子的ChIP质控引物经qPCR反应鉴定乙酰组蛋白H4(Lys5)相关DNA片段，验证免疫沉淀实验成功（见图）。
有关实验详细信息，请参阅EZ-Magna ChIPA（目录号17-408）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案。

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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