ChIPAb+ NFκB p65 (RelA) - ChIP经验证的抗体和引物组

~65 kDa

对每批、每次的全部ChIPab+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物（通过qPCR对每个批次进行检测），以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体，以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+ NFκB p65（RelA）组包括NFκB p65（RelA）抗体，阴性对照正常小鼠IgG和qPCR引物，可扩增人IκBα启动子的299 bp区域。NFκB p65（RelA）和阴性对照以可扩展的“每个ChIP”反应大小提供，可用于功能上验证NFκB p65（RelA）相关染色质的沉淀。

转录因子NFkappaB（Nuclear Factor kappa B）可参与许多重要细胞和生理过程的表达和调控，例如生长、发育、凋亡、免疫和炎症反应以及各种病毒启动子（包括人类免疫缺陷病毒长末端重复序列）的激活。NFkappaB代表一组与原癌基因c-Rel有关的结构相关且在进化上保守的蛋白质，在哺乳动物中有5个成员，包括Rel（cRel）、RelA（p65）、RelB、NFkappaB1（p50及其前体p105）和NFkappaB2 （p52及其前体p100）。NFkappaB/Rel蛋白以同二聚体或异二聚体的形式存在，以形成转录感受态或阻抑复合物。尽管大多数NFkappaB二聚体是转录激活因子，但p50/50和p52/52同二聚体可以抑制其靶基因的转录。NFkappaB的p50/p65异二聚体在细胞中含量最高。

对应BSA偶联人p65的多肽。

表位：p65亚基的NLS

染色质免疫沉淀：
代表性批次数据。
使用4 µg正常小鼠IgG或4 µg抗-NFκB p65（RelA）和Magna ChIP A试剂盒（目录号17-610），对由血清饥饿、TNFα处理（20 ng/mL，30分钟）的293个细胞制备的超声染色质（每个IP约3 X 10E6细胞当量）进行染色质免疫沉淀。
使用ChIP引物，IĸBα启动子作为阳性基因座，并使用β-肌动蛋白启动子引物作为阴性基因座，通过qPCR验证了NFκB p65（RelA）相关DNA片段的成功免疫沉淀（请参见图）。数据表示为每个IP样品相对于每个扩增子和ChIP样品的输入染色质的输入百分比。
请参阅EZ-Magna ChIP A（目录号17-409）或EZ-ChIP（目录号17-371）协议以获取实验详细信息。


蛋白质印迹分析：
代表性批次数据。
Huvec裂解物（泳道1）、L6裂解物（泳道2）和PC12裂解物（泳道3）通过电泳分离，转移到PVDF膜上，并用抗NFκB p65（RelA）（1:500稀释度）探测。
使用与HRP偶联的山羊抗小鼠二抗和化学发光检测
系统观察蛋白质。
箭头表示蛋白NFκB p65（RelA）（约65 kDa）（请参见图）。
在L6裂解物中约230 kDa处可能看到非特异性条带。

免疫荧光：浓度为1-10 μg/mL的先前批次已被用于免疫荧光中。

免疫组织化学（石蜡切片）：浓度为5-10 μg/mL（APAAP）
的先前批次已被用于免疫组化中。

免疫组织化学（冷冻切片）：浓度为5-10 μg/mL（APAAP）
的先前批次已被用于免疫组化中。

电泳迁移率变动分析（EMSA）：浓度为0.5-1 μg/mL的先前批次已被用于迁移分析中。

流式细胞术：前一批抗体用于流式细胞术。

最佳工作稀释度必须由最终用户确定。

研究子类别
转录因子

研究类别
表观遗传学&核功能

该ChIPAb+ NFκB p65（RelA）-ChIP验证的抗体&引物组方便地包括抗体 & 特异性对照PCR引物。

该抗体可识别与NFkB异二聚体的p65亚基的核定位信号（NLS）重叠的表位。因此，它可选择性地与NFkB的活化形式进行结合。

每组25次测定。推荐用于：每个染色质免疫沉淀约4 μg抗体（取决于生物学背景）。

形式：纯化

抗-NFκB p65（RelA）（小鼠单克隆）。一个小瓶，在含有0.02 M磷酸盐缓冲液、0.25 M NaCl（pH值7.6）和0.09%叠氮化钠的缓冲液中，总体积为143 uL的100 µg蛋白A纯化的单克隆IgG3，然后添加甘油至30%。储存于-20°C。

正常小鼠IgG。一个小瓶，包含125 µg纯化小鼠IgG，溶于125 µL储存缓冲液（含0.1%叠氮化钠）中。储存于-20°C。

ChIP引物，IĸBα启动子。一个小瓶，包含75 μL 5 μM人IĸBα启动子特异性引物。储存于-20°C。
用于：GAC GAC CCC AAT TCA AAT CG
REV: TCA GGC TCG GGG AAT TTC C

纯化的蛋白 A

自收到之日起在-20°C可稳定保存1年。处理建议：第一次融化后，在取下瓶盖之前，将小瓶离心并轻轻混合溶液。分装到微量离心管中，并储存于-20°C。避免反复冻融，其可能会破坏IgG并影响产品性能。注意：冷藏室温度变化至低于-20°C时可能导致含甘油的溶液在储存过程中冻结。

对照
包括阴性对照正常小鼠IgG和对人IĸBα启动子特异性的引物。

染色质免疫沉淀：
使用4 µg正常小鼠IgG或4 µg抗-NFκB p65（RelA）和Magna ChIP^® A试剂盒（目录号17-610），对由血清饥饿、TNFα处理（20 ng/mL，30分钟）的293个细胞制备的超声染色质（每个IP约3 X 10E6细胞当量）进行染色质免疫沉淀。
使用ChIP引物，IĸBα启动子通过qPCR验证了NFκB p65（RelA）相关DNA片段的成功免疫沉淀（请参见图）。
有关实验详细信息，请参阅EZ-Magna ChIPA（目录号17-408）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案。

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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