ChIPAb+三甲基组蛋白H3(Lys9) - ChIP免疫沉淀验证抗体和引物试剂套装

对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物（通过qPCR对每个批次进行检测），以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体，以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+三甲基组蛋白H3(Lys9)套装包含三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体、正常小鼠IgG、对照引物（用于扩增ZNF554的117bp区）。三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体和阴性对照抗体的规格与ChIP反应次数成比例，可用于功能性验证三甲基组蛋白H3(Lys9)相关染色质的免疫沉淀。

组蛋白H3是参与真核细胞染色质结构的五种主要组蛋白之一。H3具有一个主要的球状结构域和一个长N末端的尾巴，其与核糖体核小体′串珠′结构体的结构有关。组蛋白的翻译后修饰程度较高，其中组蛋白H3是5种组蛋白中修饰最广泛的。组蛋白H3的序列变异和可变修饰状态在基因的动态及长期调控中发挥着作用。Lys9（H3K9me3）上组蛋白H3的三甲基化是研究最深入的表观遗传标记之一。H3K9me3在常染色体基因的抑制和异染色质组装的表观遗传控制中起作用，最有可能通过充当与染色质相关蛋白（例如Swi6或HP1α）结合的识别基序来发挥作用。负责H3K9三甲基化的酶是SUV39H1和Suv39h2。

基于序列相似性，预期具有广泛的物种交叉反应。

该抗体可识别在Lys9处三甲基化的组蛋白H3。浓度较高时，会与二甲基Lys9发生交叉反应，但特异性差别>27倍。1Ser10磷酸化会干扰抗体与三甲基Lys91的结合。

对应于Lys9三甲基化人组蛋白H3的KLH标记合成肽。

表位：三甲基化Lys9

染色质免疫沉淀：
代表性批次数据。
采用1 µL正常小鼠IgG或1 µL抗三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体和Magna ChIP^® G试剂盒（货号17-611），对HeLa细胞来源的、超声制备的染色质（每次IP需1 X 10E6细胞）进行染色质免疫沉淀。 以人ZNF554区域特异性ChIP引物为阳性位点，人GAPDH启动子引物为阴性位点，经qPCR反应鉴定三甲基组蛋白H3(Lys9)相关DNA片段，验证ChIP实验成功。 （图2）。 数据表示为每个IP样本扩增子值相对于染色质输入(input)扩增子值的百分比(Percent Input)，ChIP样本如图所示。
实验详细信息请参阅EZ-Magna ChIP G（货号17-409）或EZ-ChIP（货号17-371）试剂盒方案。
蛋白质印迹分析：
代表性批次数据。
电泳分离重组组蛋白H3（货号14-494）（泳道1）和HeLa细胞酸提取物（泳道2），转印至PVDF膜，用抗三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体（克隆号CMA308）(2 μg/mL)检测。 用HRP标记的山羊抗小鼠二抗和化学发光检测系统对蛋白显色。

箭头表示三甲基组蛋白H3(Lys9)（~17 kDa）。（图3）。

研究子类别
组蛋白

研究类别
表观遗传学&核功能

该ChIPAb+三甲基组蛋白H3(Lys9)-ChIP验证抗体&引物套装方便提供了抗体&PCR特异性对照引物。

每组25次测定。推荐用于：每次染色质免疫沉淀约1 μL抗体（取决于生物学背景）。

染色质免疫沉淀：
代表性批次数据。
采用1 µL正常小鼠IgG或1 µL抗三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体和Magna ChIP^® G试剂盒（货号17-611），对HeLa细胞来源的、超声制备的染色质（每次IP需1 X 10E6细胞）进行染色质免疫沉淀。 以人ZNF554区域特异性ChIP引物为阳性位点，经qPCR反应鉴定三甲基组蛋白H3(Lys9)相关DNA片段，验证ChIP实验成功。 有关实验详细信息，请参阅EZ-Magna ChIPG（目录号17-409）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案。

~17 kDa

形式：纯化

抗三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体（小鼠单克隆）。1小瓶，25 µL纯化小鼠单克隆IgG1，溶于PBS，含有0.05%叠氮化钠，然后添加甘油至30%。储存于-20°C。
正常小鼠IgG。1小瓶，包含25 µg纯化IgG，溶于25 µL储存缓冲液（含0.1%叠氮化钠）中。 在-20°C下储存。
对照引物，ZNF554。1小瓶，含有75 μL的5 μM人ZNF554 3’端特异性引物。在-20°C下储存。
正向：CGG GGA AAA GCC CTA TAA AT
反向：TCC ACA TTC ACT GCA TTC GT

蛋白G纯化

自收到之日起，在2-8°C条件下可稳定保存1年。为了最大程度地回收产品，在取下盖子之前，将原始样品瓶进行离心。避免反复冻融循环，以免损坏IgG和影响产品性能。

对照
包括正常小鼠IgG和人ZNF554特异性引物。

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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