~43 kDa

对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物（通过qPCR对每个批次进行检测），以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体，以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+CREB，抗体/引物组包括CREB抗体，阴性对照抗体（纯化的兔IgG）和qPCR引物，可扩增人cFos基因CRE侧翼的64 bp区域。CREB和阴性对照培养上清液以可扩展的“每个ChIP”反应大小提供，可用于功能上验证与CREB相关染色质的沉淀。

每批ChIPAb+抗体系均经过染色质沉淀的单独验证，以确保每次成功进行ChIP分析。每种抗体均包含用于性能确认的对照引物组。CREB抗体和阴性对照抗体（兔正常IgG）可用于证明CREB抗体在CREB相关染色质沉淀中得到功能验证。
qPCR引物包括人NR4A2启动子中CREB结合位点的侧翼。

CREB纯化的抗体是针对与人CREB的氨基酸5-24对应的KLH偶联的合成肽制备的。

表位：氨基酸5-24

染色质免疫沉淀：
代表性批次数据。
使用10 µL阴性上清液或CREB抗体和Magna ChIP^® A试剂盒（目录号17-610），对从293T细胞制备的超声染色质（每IP 5 X 10⁶细胞当量）进行染色质免疫沉淀。
使用cFos下游4Kb（阴性）和cFos CRE（阳性）通过qPCR验证了CREB相关DNA片段的成功免疫沉淀（图2）。 数据表示为每个IP样品相对于每个扩增子和ChIP样品的输入染色质的输入百分比。
请参阅EZ-Magna A ChIP（目录号17-408）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案以获取实验详细信息。

蛋白质印迹分析：
代表性批次数据。
HeLa核提取物通过电泳分离，转移到硝酸纤维素上，并用抗CREB，克隆NL904（1:8,000稀释液）探测。
使用与HRP偶联的山羊-兔二抗和化学发光检测系统可视化蛋白质。
箭头表示CREB（~43 kDa）。

研究子类别
染色质生物学

研究类别
表观遗传学&核功能

该ChIPAb+CREB -ChIP验证的抗体 & 引物组方便地包括抗体 & 特异性对照PCR引物。

可识别CREB，MW ~43 kDa。

未经其他物种测试。该免疫原序列在广泛的动植物物种中是相同的，因此预期有广泛的交叉反应性。。

每组25次测定，每次染色质免疫沉淀约10 μL。

每组25次测定。推荐用于：每个染色质免疫沉淀约10 μL抗体（取决于生物学背景）。

自收到之日起在-20°C可稳定保存1年。处理建议：第一次融化后，在取下瓶盖之前，将小瓶离心并轻轻混合溶液。分装到微量离心管中，并储存于-20°C。避免反复冻融循环，以免损坏IgG和影响产品性能。

染色质免疫沉淀：
使用10 µL阴性对照培养上清液或CREB抗体和Magna ChIP^® A试剂盒（目录号17-610），对从293T细胞制备的超声染色质（每IP 5 X 10⁶细胞当量）进行染色质免疫沉淀。 使用对照引物通过qPCR验证了CREB相关DNA片段的成功免疫沉淀（图1）。
有关实验详细信息，请参阅EZ-Magna ChIPA（目录号17-408）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案。

对照
包括阴性对照培养的上清液和对人cFos CRE特异的引物。

抗CREB（兔单克隆IgG）：物品编号CS203204。一个小瓶含有250 μL培养的上清液（含0.05%叠氮化钠）。 储存于-20°C。
阴性对照上清液：物品编号CS203202。一个小瓶含有250 μL培养的上清液（含0.05%叠氮化钠）。 储存于-20°C。
ChIP引物cFos CRE：物品编号CS203203。一个小瓶含有75 μL的5 μM cFos CRE特异性引物。储存于-20°C。
对于：GGC CCA CGA GAC CTC TGA GAC A
REV: GCC TTG GCG CGT GTC CTA ATC T

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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