ChIPAb+三甲基组蛋白H3(Lys9) - ChIP免疫沉淀验证抗体和引物试剂套装

对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物（通过qPCR对每个批次进行检测），以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体，以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+三甲基组蛋白H3(Lys9)套装包含抗三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体、阴性对照抗体（纯化兔IgG）、qPCR引物（用于扩增人ZNF554基因3’端的117bp区域）。三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体和阴性对照抗体的规格与ChIP反应次数成比例，可用于功能性验证三甲基组蛋白H3(Lys9)相关染色质的免疫沉淀。

组蛋白的甲基化可以发生在两个不同的残基上：精氨酸或赖氨酸。组蛋白甲基化可以与转录激活或抑制相关，具体取决于甲基化残基。组蛋白H3的赖氨酸9可以通过不同的组蛋白甲基转移酶（HMTs）（例如，SuvH39H1或G9a）单甲基化、二甲基化或三甲基化。该甲基化的赖氨酸可以通过组蛋白脱甲基酶（如JMJD1A，LSD1或JMJD2C）脱甲基。该残基的甲基化主要与转录抑制有关。

识别赖氨酸9三甲基化的组蛋白H3，分子量(Mr) 17 kDa。

该免疫原序列在广泛的动植物物种中是相同的，因此预期有广泛的交叉反应性。。

三甲基组蛋白H3 (Lys9)抗体由含有序列…AR[me3K]S…的BSA标记合成肽免疫制备，其中me3K对应人组蛋白H3的三甲基赖氨酸9。

三甲基组蛋白H3(Lys9)ChIP验证抗体&引物套装，包括ChIP级抗体&PCR特异性对照引物，用于H3K9Me3的染色质免疫沉淀。

染色质免疫沉淀：
采用4 μg的纯化抗体或正常兔IgG和Magna ChIP A试剂盒（货号17-610），对来自2x10⁶个HeLa细胞的、超声制备的染色质进行染色质免疫沉淀。
使用针对人GAPDH启动子的ChIP引物和针对人MyoD启动子的引物，经qPCR鉴定三甲基组蛋白H3(Lys9)相关DNA片段，验证免疫沉淀成功。
详细实验方案请参阅 EZ-Magna ChIP A（货号17-408）或EZ-ChIP（货号17-371）试剂盒使用方法。

蛋白质印迹分析：
电泳分离重组组蛋白H3（泳道1）和HeLa细胞酸提取物（泳道2），转移至硝酸纤维素膜，用抗三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体(1 μg/mL)检测。通过HRP标记山羊抗兔二抗和化学发光检测系统对蛋白显色（如图）。

Beadlyte组蛋白-肽特异性试验：
将0.5 μg/ml纯化抗二甲基组蛋白H3(Lys9)与具有下列修饰的组蛋白H3肽标记的微珠混合物共同孵育：
1. 三甲基-赖氨酸9
2. 二甲基-赖氨酸9
3. 单甲基-赖氨酸9
4.无修饰H3
过滤去除未结合抗体。将肽-抗体复合物与PE标记的抗兔二抗共同孵育。在Luminex 100仪器上读取荧光。绘制了中值荧光强度（MFI）。

抗三甲基组蛋白H3(Lys9)多克隆抗体，1瓶

ZNF554引物对，1瓶

染色质免疫沉淀：
采用4 µg正常兔IgG或抗三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体和Magna ChIP A试剂盒（目录号17-610），对从3x10⁶ NIH3T3 L1细胞超声制备的染色质进行染色质免疫沉淀。 使用ChIP引物ZNF554通过qPCR验证了三甲基组蛋白H3(Lys9)相关DNA片段的成功免疫沉淀（请参见图）。
有关实验详细信息，请参阅EZ-Magna A ChIP（目录号17-408）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案。

17kDa

形式：纯化

抗三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体（兔多克隆IgG）。1小瓶，包含100 μg蛋白A纯化IgG，溶于100 μL 0.02 M磷酸盐缓冲液（pH 7.4）、0.25 M NaCl、0.05%叠氮化钠和30%甘油。 储存于-20°C。

正常兔IgG。1小瓶，包含125 μg正常兔IgG，溶于125 μL储存液（含0.1%叠氮化钠）。储存于-20°C。

ChIP引物，ZNF554。1小瓶，包含75 μL ZNF554基因特定引物各5 μM。在-20°C下储存。
正向：CGG GGA AAA GCC CTA TAA AT
反向：TCC ACA TTC ACT GCA TTC GT

对照
包括阴性对照兔IgG抗体和对ZNF554特异性的对照引物。

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