抗骨涎蛋白II 抗体

骨涎蛋白II 是骨骼细胞外基质中的主要非胶原蛋白之一。它是一种磷酸化糖蛋白，分子量大约为70 kDa。该蛋白存在于成骨细胞和骨细胞中。涉及骨转换（bone turnover）的疾病、病理性骨改变以及骨质疏松症的迅速增多使得我们需要确立新的标志物，骨涎蛋白就是一种用于监控骨重塑（bone remodelling）的潜在血清标志物。

抗骨涎蛋白II 抗体是针对骨涎蛋白的抗体，用于ELISA、IC、IH、IH(P)、RIA & WB 。

蛋白质印迹
免疫组化（石蜡）（参见以下建议的方案）
免疫细胞化学（1：100）
RIA
ELISA
最佳工作稀释度必须由最终用户确定。

兔抗骨涎蛋白1854的建议染色步骤
该方案已用于来自人胚胎胫骨、人胚胎颅顶、转移至骨骼的人乳腺肿瘤的、经过10%甲酸脱钙处理的5 um石蜡包埋切片。

1.脱蜡：二甲苯 5 分钟 - 二甲苯 5 分钟. - 二甲苯 5 分钟
2.再水化：100%乙醇 3 分钟 - 95% 乙醇 3 分钟 - 70% 乙醇 3 分钟
3.以流动的自来水清洗切片5分钟。
4.在PBS中清洗切片。
5.封闭内源性过氧化物酶：0.3%过氧化氢的无水甲醇溶液（2 mL 30% H2O2溶于198 mL 甲醇）处理30分钟。（用铝箔盖上瓶子，培养过程中搅拌）
6.以流动的自来水清洗切片10分钟
7.用免疫组化笔标记组织区。
8.以300 mL 封闭液盖住组织区，在室温下培养30分钟（封闭液：6 mL PBS、0.3 gm BSA、120 mL 正常山羊血清）。
9.抖掉多余的液体（不要清洗）。
10.与一抗（AB1854，在PBS-T中稀释为1：2,500 i）一起在2-8°C 下在潮湿的培养箱中过夜培养。
11.在室温下以PBS-T冲洗，再以PBS-T清洗3次，每次5分钟。
12.与生物素化二抗（如 Chemicon AP132B）一起在室温下培养30分钟。
13.在室温下以PBS-T冲洗，再以PBS-T清洗3次，每次5分钟。
14.在室温下将切片与Vector ABC试剂一起培养30分钟。（ABC试剂：2滴A和2滴B，溶于 5 mL PBS，使用前在室温下静置30分钟）
15.在室温下以PBS-T冲洗切片3次，每次5分钟。
16.以DAB展开5-10分钟。
17.以流动的自来水清洗。
18.以Mayer′s HX 对比染色（Counter stain ）45 秒，以流动的自来水清洗 。
19.脱水：70%乙醇 - 95% 乙醇 - 100% 乙醇，每次1分钟。
20.以二甲苯清洗、安装切片、干燥。

人和大鼠骨涎蛋白（BSP） 。在RIA 或 ELISA中与人骨桥蛋白或骨粘连蛋白没有交叉反应。

其他物种尚未经过测试

冻干。在 100 μL 实验室用水（aqua bidest）中重悬。不含防腐剂。

将未稀释的等分试样在2-8°C（冻干）或 -20°C（复溶）下可保持最多 6 个月。应避免反复冻/融循环。

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany